垂盆草化学成分及质量研究

【摘要】： 1. 目的：垂盆草来源于景天科（Crassulaceae）景天属（Sedum）多年生草本植物Sedum sarmentosum Bunge.新鲜或干燥全草。垂盆草始载于《本草纲目拾遗》，原名狗牙半支。我国分布广泛，性凉味甘淡，新鲜或干燥全草入药。商品药材均为干燥品。垂盆草具有清利湿热、解毒之功，临床用于湿热黄疸、小便不利、痈肿疮疡、急、慢性肝炎的治疗，民间用于治疗各种肝炎。该药是中国药典收载品种，是垂盆草冲剂的主要成分。以前有人用垂盆草苷做指标成分，垂盆草苷遇热、遇碱不稳定，目前国内外没有此对照品，所以不宜用垂盆草苷做对照品。本课题是旨在研究活性成分的基础上，找出能控制质量的指标性成分即对照品，从而为控制质量提供科学依据。 2. 方法：全文共分六个部分：一、对垂盆草进行了本草考证和生药学研究。二、化学成分的研究，用95%乙醇提取3次，回收乙醇，加水悬浮后，分别用不同溶剂萃取，得到氯仿、乙酸乙酯、正丁醇部分，分别用硅胶、聚酰胺、Sephadex-LH-20、C18等柱制备色谱技术进行化学成分分离；用UV、IR、1HNMR、13CNMR等鉴定技术进行化合物鉴定。采用活性跟踪的方法，结合活性筛选的结果，对垂盆草进行了较为系统的化学成分研究；三、药理活性的测定研究，通过药材的功效来设计试验，通过动物或相应的体外模型来筛选、研究了化合物对小鼠脾脏T、B淋巴细胞转化增殖的影响、对四氯化碳损伤的原代培养大鼠肝细胞培养液中ALT含量的影响，从来确定有效成分。四、对照品的研究，根据药理活性的筛选结果和化合物的专属性来确定对照品，并对对照品的性质和稳定性进行研究。五、用TLC和HPLC法研究药材指标性成分的定性和定量方法。六、优先选用了HPLC法对垂盆草进行指纹图谱研究。 结果：通过以上研究对垂盆草的质量控制方法取得了一定的进展。垂盆草95%乙醇提取物经不同极性的溶剂萃取，从氯仿、醋酸乙酯、正丁醇部分得到三萜类、黄酮类、甾醇类、硫醇类、硫醚类、有机酸类等共计三十一个化合物，经波谱解析、化学分析确定了其中二十个化合物的结构，它们分别为5,4′-二-羟基-3′，5′-二甲氧基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(tricin-7-O-β-D-glucoside I)、木犀草素(Luteolin II)、异鼠李素(Isorhamnetin III)、异甘草素(Isoliquiritigenin IV)、δ-香树脂酮（δ WP=5 -Amyrione V）、3β，6β-豆甾-4，22-二烯-3，6-二醇（3β，6β-Stigmast-4，22-dien-3，6-diol VI）、槲皮素（quercetin VII）、β-谷甾醇（β-Sitosterol VIII）、胡萝卜苷（Daucosterol IX）、十五烷基硫醇（pentadecyl mercaptan X）、丁香酸（4-hydroxy-3,5-dimethoxybenzoic acid XI）、3,4,5-甲氧基苯甲酸（3,4,5-trimethoxybenzoic acid XII）、双十八烷基硫醚(dioctadecyl sulfideXIII)、棕榈酸(palmic acid XIV)、苯甲酸甲酯（benzoic acid methyl ester XV）、3-表-δ-香树脂醇（3-epi-δ-AmyrinXVI）,δ-香树脂醇（δ-AmyrinXVII），β-D-半乳糖-(3-1′)-β-D-葡萄糖-（4′-1〞）-β-D-阿洛糖（beta-D-galactopyranosyl-(3-1′)-beta-D-glucopyranosyl-（4′-1〞）-beta-D-Allose XVIII）和KNO3、NaNO3（化合物 A 、B）。其中化合物X、VI、VII、XII、XIII、XIV、XV、XVIII是首次在该植物中发现。另还有9个化合物尚在鉴定中。体外活性实验表明化合物I能明显抑制小鼠脾脏T、B淋巴细胞转化增殖。化合物V能使四氯化碳损伤的原代培养大鼠肝细胞培养液中ALT含量显著降低；垂盆草乙醇提取液（正丁醇、乙酸乙酯、水萃取部分）也有一定程度的作用。本研究就指标性成分进行了研究，发现tricin-7-O-β-D-glucoside具有很好药理活性（免疫抑制作用）和专属性，故我们认为tricin-7-O-β-D-glucoside可以作为质量控制的一个指标成分。δ-香树脂酮能使四氯化碳损伤的原代培养大鼠肝细胞培养液中ALT含量显著降低，有很好的专属性，也可以作为指标性成分之一。研究并优化了对照品tricin-7-O-β-D-glucoside的制备工艺路线，认为直接用60%乙醇提取，得率比较高，在柱分离过程中直接用洗脱剂洗脱，接近对照品洗脱比例的时候，用对照品TLC跟踪，收集流份，提高了分离速度。研究并确定了对照品tricin-7-O-β-D-glucoside TLC定性鉴别和HPLC含量测定的方法，tricin-7-O-β-D-glucoside含量不得低于0.01%。对照品tricin-7-O-β-D-glucoside进行了初步稳定性试验研究，认为tricin-7-O-β-D-glucoside在室温较稳定，超过90℃开始变化，230℃基本破坏。在酸性条件下较稳定（Ph=2～3）；而在碱性条件下较为敏感，当Ph＞5时明显不稳定。研究并确定了δ-香树脂酮（δ- Amyrin）TLC定性鉴别和HPLC含量测定的方法，加工方法对δ-香树脂酮含量有明显影响，且有一定规律性，即含量由高到低的顺序为新鲜药材＞自然晒干＞60℃烘 WP=6 3. 干＞水烫（95℃）＞微波3分钟。不同采收季节对δ-香树脂酮含量也有影响，一般含量由高到低的顺序是9月＞8月＞7月＞6月。从产地看四川峨眉山、北京香山的含量比较高。以上是考察了产地、加工方法、采收季节对δ-香树脂酮含量含量的影响。认为δ-香树脂酮含量不得低于0.5%，大于1.0%为较好。研究了不同产地、

【关键词】：δ-Amyrin tricin-7-O-β-D-glucosi垂盆草 化学成分 药理 含量测定 指纹图谱 对照品 肝炎
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2003
【分类号】：R282.71
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