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《北京中医药大学》 2003年
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中药金思维对Aβ所致AD大鼠模型脑血管和神经元损伤的保护机制研究

程龙  
【摘要】: 1.背景 AD给个人、家庭及社会带来沉重的负担和痛苦。重视老年性痴呆及其相关疾病的防治,具有重要意义。神经元损害、认知损害和记忆丧失的程度与β-淀粉样物质沉积范围有关。研究认为,βAPP→Aβ→SP或CAA→神经元和血管损伤→智能障碍→痴呆,βAPP/Aβ与SP、CAA以及ChAT、S100β、Bcl-2/Bax等相关基因关系密切,通过治疗干预Aβ生成与代谢,可减轻或抑制SP或CAA造成的损害。中药治疗AD有一定的疗效,但是深入的机制并不清楚,尤其是参与AD发病的血管因素的干预仍未见报道。本研究在British AD Trust资助的中英合作项目“血管因素在AD发病机理中的作用”的基础上,作为“长江学者特聘教授奖励计划”资助项目的课题之一,从行为学、神经病理学,细胞、分子、基因水平探讨中药复方制剂金思维的治疗机理。 2.目的 运用现代分子神经病理学和行为学技术,围绕炎症假说、淀粉样蛋白瀑布流假说,以神经元和脑血管为保护目标,着眼于AD的关键病理机制Aβ(β淀粉样蛋白沉积和淀粉样血管病变)及其代谢,开展中药补肾活血化痰复方制剂金思维对损伤的神经元和血管的保护作用机理研究,从而探讨其防治老年性痴呆的机理。 3.材料与方法 12月龄SD大鼠,随机分为假手术组与模型组(分3天、7天,14天和28天时间段)、中药治疗组和治疗对照组(分14天,28天时间段),除假手术组外,其余组用微量注射器给予右侧海马一次性注射凝聚态Aβ_(1-40)2μ1(10μg)。中药治疗组于手术后第3天开始灌胃0.7ml/100g灌胃,日1次。对照治疗组将安理申片磨碎,加入蒸馏水制成溶液,0.92mg/Kg,按0.7ml/100g灌胃,日1次。行为学检测于术后第23天开始,共5天,测试28天时间段各组大鼠Morris水迷宫行为学变化。分别在3天、7天、14天和28天,4%多聚甲醛灌注取材,常规石蜡切片,沿注射点附近连续冠状切片,片厚6μm,海马区连续切片15套,以备各种染色。用苏木素-伊红染色(HE染色)检测脑病理组织学;刚果红染色检查病脑组织和血管淀粉样物质沉积;用甲苯胺篮染色法进行神经尼氏体染色;用透射电子显微镜观测海马神经元、神经纤维与血管的超微结构;用SABC法进行Aβ、βAPP、ChAT、S100β、Bcl-2、Bax和Synaptophysin免疫组织化学染色;原位杂交法检测βAPPmRNA表达。运用SPOT Ⅱ DIAGNSTIC INSTRUMENT INC成像系统照像,MetaMorph图象分析系统分析海马和皮质损伤区域附近以上各指标的光密度值、阳性表达面积以代表阳性表达面积和强度。 4.结果 4.1 Aβ所致AD模型大鼠学习记忆障碍,其海马和皮质神经元损伤和血管损害严重,相关基因表达符合AD临床特点。 4.2 Morris水迷宫行为学检测显示,治疗组总的逃避潜伏期(sec)和总平均游泳长度(cm)以及各象限的逃避潜伏期(sec)和平均游泳长度(cm)均少于模型组,具有显著性差异(p<0.05),并与假手术组无显著性差异(p>0.05)。效果等同于安理申对照组(p>O.05)。 4.3 神经病理组织学显示,治疗组Aβ所造成的神经元和血管损害显著减轻。透射电镜超微结构检查显示,中药组神经纤维变性损伤显著改善,炎性反应明显减轻。免疫组化和图象分析半定量检测显示,中药治疗组28天海马与皮质Aβ阳性区域光密度值以及Aβ阳性表达面积(μm~2)均较模型组明显下降,与正常组无显著性差异(P>0.05)。治疗组28天血管Aβ阳性表达区域光密度值明 -4-中药金思维对A日所致AD大鼠模型脑血管和神经元损伤的保护机制研究 显下降(P<0.05),与正常组无显著性差异(ho.05八其阳性表达面积(p m勺亦明显低于模型组 7 天和 28天相应水平(Pi.05),优于对照治疗组(P<D.05)。 4.4金思维治疗组 14天海马、2 8天海马与皮质 p APP阳性区域表达面积(vd)瓣型组相应部位 明显靴(P<(.05,P<(.01),优于对照治疗组(P<t).05)。14天和 28天海马与皮质卜 PPfnRNA阳 性表达区域光密度值与阳性表达面积(叫)较模型组明显下降,与正常组相应数值无显著性差异 (ho.0n。并且,治疗组 28天海马 6 APPInRNA阳性表达区域光密度值与阳性表达面积(P m勺均低 于对照组28天海马的相应数值(P<(.05)。 4.5金思维治疗组14天士8天海马和皮质5100 p阳性表达区光密度值与阳性表达面积(Urn’)较模 型组均明显下降,并且与正常组无显著性差异(ho.05)。对照组14天、28天皮质5100 p阳性表 达区域光密度与面积(Pmj仍高于正常组(P<D.01)。 4.6治疗组 2 8天海马仇 1刁阳性表达区域光密度值与阳性表达面积(p m‘)显著高于模型组 2 8天海 马相应数值(P<D.05)。海马Bax阳性表达区光密度值鞭型组明显下降(尸i.05),与正常组无 显著牲差异(A0.05),优于对照治疗组(P刃.05)。 4.6治疗组14天与28天SnnaPtoohosin阳性表达区光密度值较模型组明显增高(P<0.01),并且 与正常组相应区域无显著性差异(ho.05)。治疗组14天海马阳性表达区光密度值显著高于对照 5疗组14天才应数值(P刃.01)。 5结论 5.IAp所致AD模型大鼠学习记忆障碍,其海马和皮质神经元损伤和血管损害严重,相关基因表
【学位授予单位】:北京中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R285.5

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【引证文献】
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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【同被引文献】
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6 本报记者 王家华;招金思维[N];中国矿业报;2003年
7 何振红 顾阳;“金思维”改制的范本解读[N];经济日报;2004年
8 ;金思维:组件化突破行业屏障[N];中国计算机报;2003年
9 股海幸运星;私募基金思维解读[N];证券日报;2004年
10 本报记者 张克旭;常熟纺机厂借ERP改造生产供应链[N];中国计算机报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前8条
1 程龙;中药金思维对Aβ所致AD大鼠模型脑血管和神经元损伤的保护机制研究[D];北京中医药大学;2003年
2 李小黎;金思维提取物对Aβ致类AD模型神经元突触的保护作用及其机制研究[D];北京中医药大学;2005年
3 周忠光;补阳还五汤对Aβ_(1-40)所致AD大鼠β-淀粉样蛋白影响及相关机制的研究[D];黑龙江中医药大学;2007年
4 牛亚利;血管性认知障碍中医证候与认知功能相关性研究[D];广州中医药大学;2007年
5 王晔;淀粉样脑血管病的临床和神经病理学研究[D];第二军医大学;2002年
6 韩翔;皮质下血管性认知功能损害的临床病理研究[D];复旦大学;2009年
7 许丹;脑老化部分组织形态学改变观察[D];中国人民解放军军医进修学院;2003年
8 宋志宇;大鼠阴茎海绵体内注射血管内皮生长因子基因治疗勃起功能障碍的研究[D];吉林大学;2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 苗兵;补阳还五汤对AD大鼠β-淀粉样前体蛋白及细胞因子影响的实验研究[D];黑龙江中医药大学;2008年
2 何锐;髌内侧滑膜皱襞综合征患者髌股关节疼痛的神经病理学观察研究[D];第三军医大学;2008年
3 王琼;髓鞘少突胶质细胞糖蛋白_(35-55)诱发实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠模型的病理学研究[D];华中科技大学;2006年
4 吕衡;补阳还五汤对AD大鼠β-APP及凋亡相关蛋白影响的实验研究[D];黑龙江中医药大学;2008年
5 刘佳;缺血性脑血管病患者认知功能变化及其血管因素研究[D];青岛大学;2011年
6 刘祥琴;阿尔茨海默病和血管性痴呆患者内源性硫化氢及相关指标的变化与意义[D];重庆医科大学;2007年
7 程新春;阿尔茨海默病与血管性痴呆的血管性因素分析[D];新疆医科大学;2007年
8 陈方方;脑梗死后痴呆的相关因素分析[D];新疆医科大学;2007年
9 张福宏;微血管减压与面神经梳理术治疗半面痉挛的远期疗效观察[D];吉林大学;2009年
10 陈坤;丁苯酞对阿尔茨海默病模型大鼠GFAP、VEGF影响的实验研究[D];中南大学;2009年
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