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《北京中医药大学》 2003年
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重肌灵抗重症肌无力的主要药理作用及作用机制的研究

韩涛  
【摘要】: 重肌灵是河北以岭医药研究院临床长期用于治疗重症肌无力(Myasthenia gravis,MG)的有效中药复方,主要由黄芪、人参、鹿茸等组成,临床治疗上千例MG患者,取得比较好的疗效,具有温理奇阳,扶元振颓作用。重症肌无力(MG)是重点累及神经一肌肉接头处突触后膜上乙酰胆碱受体,主要由乙酰胆碱受体抗体介导的,T细胞依赖性、补体参与的自身免疫性疾病。实验性自身免疫性重症肌无力(Experimental Autoimmune myasthenia gravis,EAMG)被认为是研究MG的重要动物模型,目前公认的EAMG模型是用电鳐(Torpedo)或电鳗的电器官提取,纯化的N2-乙酰胆碱受体(Acetylcholine receptor,AchR)作为抗原免疫动物而成。本论文以Lewis大鼠建立EAMG模型,从与MG发病机理密切相关的N2AchR抗原特异性细胞免疫和体液免疫入手,将研究重点集中在MG发病机制中最重要的环节Th亚型细胞及Th亚型细胞分泌产生细胞因子IL-4、IFN-r;胸腺又是T细胞发育成熟的部位,而引起MG、EAMG的直接因素是体内产生抗N2AchR抗体。所以将胸腺—Th亚群—IL4、IFN-r—抗N2AchR抗体为轴心,运用3H-TdR掺入、ELISA、原位杂交检测及细胞凋亡检测技术,从整体、组织、细胞、分子水平深入研究重肌灵抗重症肌无力的作用机理。主要研究内容如下: 1.大鼠EAMG模型建立 从电鳐电器官中提取N2AchR粗提物,N2AchR粗提物和完全福氏佐剂等量混合,模型组大鼠尾根部,足垫部,背部皮下多点注射上述含N2AchR抗原液0.5ml/只,分别于实验的第1日、第14日、第30日共免疫3次。于未次免疫的19-21日,从临床症状、体重、肌力、运动能力及肌电、肌肉中N2AchR损失率及血中抗N2AchR抗体滴度来评价模型是否成功。结果表明,模型组大鼠上述指标与正常组、佐剂组相比,均有显著差异P0.01,说明模型建立成功。用本方法建立的模型经济、成功率高,方法易于普及,在临床症状,病理表现等方面与人类MG相似,可用来免疫大量动物,进行MG发病机理及药效学研究。 2.重肌灵对EAMG大鼠主要药效学研究 用N2AchR粗提物加完全福氏佐剂方法免疫Lewis大鼠,制备EAMG大鼠模型。观察重肌灵预防给药对EAMG大鼠的影响。重肌灵大中剂量(6.56g/kg、3.28g/kg)可明显改善EAMG大鼠临床症状(P0.01和P0.05),对EAMG组大鼠体重有提高作用;对大鼠攀网研究显示重肌灵大中剂量组能显著提高EAMG大鼠肌力(P0.05),表明重肌灵有提高EAMG大鼠肌力作用;采用旷场试验分析发现,重肌灵大中剂量组可显著提高EAMG大鼠跨格次数和理毛次数(P0.01和P0.05),表明重肌灵显著改善EAMG大鼠的运动能力;采用ELISA法发现重肌灵三个剂量组均可降低EAMG大鼠血清中抗N2AchR抗体含量(P0.01和P0.05),三组呈量效关系;重肌灵大中剂量还可缓解EAMG大鼠连续低频电刺激(5Hz,10Hz)后出现的大鼠腓肠肌收缩的衰减(P0.01和P0.05);重肌灵三个剂量组对EAMG大鼠后肢肌肉突触后膜上N2AchR数目有显著升高作用,(P0.01和P0.05),其受体数目分别为正常组的78%,60%,48.7%(模型组为31%)。以上结果证明重肌灵对EAMG模型大鼠有明显防治效果。现代医学治疗该病以糖皮质激素为主,但副作用多;中医中药治疗该病虽时有报道,但尚未开发为中药新药。本实验为将重肌灵开发为临床治疗重症肌无力的中药新药提供了有力的依据,必将带来一定的社会效益和经济效益。 3.重肌灵和地塞米松对EAMG大鼠及正常小鼠免疫功能的影响 3.1对EAMG大鼠免疫功能的影响 重肌灵大中小剂量能显著增强ConA诱导的 WP=5 EAMG大鼠淋巴结T细胞增殖(P0.01和P0.05);而地塞米松则明显抑制其增殖(P0.01);重肌灵大中小剂量能显著抑制纯化的N2AchR特异性抗原诱导EAMG大鼠淋巴结T细胞增殖(P0.01)及DTH反应(P0.01);地塞米松则呈现明显的抑制作用。 3.2重肌灵对正常小鼠免疫功能的影响 重肌灵大中剂量能显著增强ConA和LPS诱导的正常小鼠脾T和B淋巴细胞增殖(P0.01或P0.05);重肌灵大中剂量对正常小鼠抗体形成细胞功能具有明显促进作用,对血凝抗体滴度也有明显的提高作用(P0.01)。 以上结果证明重肌灵能明显抑制N2AchR特异性抗原诱导的EAMG大鼠细胞免疫和体液免疫反应,但对ConA诱导的细胞免疫反而有增强作用;对正常小鼠ConA、LPS诱导的细胞免疫、体液免疫及对SRBC诱导的体液免疫有增强作用,证明重肌灵抗EAMG的作用是不同于西药免疫抑制剂地塞米松作用。 4.重肌灵对EAMG大鼠免疫调节机制的研究 采用ELISA法检测与MG、EAMG发生发展密切相关的Th1型因子IFN-r,Th2型因子IL-4变化,发现重肌灵大中剂量可显著下调EAMG大鼠血中升高的IL-4,IFN-r水平;采用原位杂交法观察重肌灵对EAMG大鼠胸腺IL-4,IFN-rmRNA表达的影响发现,重肌灵大中剂量组能显著降低EAMG大鼠胸腺IL4,IFN-rmRNA表达,结合对血中IL-4,IFN-r水平影响,可推测重肌灵抗EAMG机制可能是通过降低机体IL-4,IFN-rmRNA表达,减少IL-4,IFN-r分泌,纠正Th1、Th2免疫功能紊乱,从而降低抗N2AchR抗体产生。 5.重肌灵对EAMG大鼠胸腺细胞凋亡的影响 MG、EAMG存在N2AchR特异性T细胞凋亡的减少,采用TUNEL法,从基因水平观察重肌灵对EAMG大鼠胸腺细胞凋
【学位授予单位】:北京中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R285.5

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【引证文献】
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10 李福金;Th17细胞在实验性自身免疫性重症肌无力发病机制中作用的研究[D];延边大学;2010年
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