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《北京中医药大学》 2003年
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温涩法和温下法对溃疡性结肠炎免疫功能影响的比较研究

巩阳  
【摘要】: 1 目的: 溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种原因不明的炎症性肠病,易发展成结肠癌,在我国发病率在不断上升,而现在此病仍未解决用药副作用大,易复发的难点。为寻求更好的解决此病的方法,揭示UC的发病机制,减少UC的复发率,本文总结了祖国医学对UC的认识和研究及现代医学对UC的研究;并在以往温涩法和温下法在治疗UC方面取得了良好的临床效果的基础上,本文着重探讨了温涩法和温下法对UC实验大鼠免疫机制影响的比较研究。 2 方法: 2.1理论研究: 上篇理论研究分别从中医、西医两个方面对UC进行了系统的论述。在现代医学研究概况中,着重UC目前公认的免疫发病机制进行了阐述;在中医研究概况中,系统的回顾了祖国医学对UC病因、病机的认识,并对UC的治疗现状和中医实验研究进展进行了概述。 2.2实验研究: 采用TNBS/乙醇法造模。随机分为正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶组、真人养脏汤组、温脾汤组,分别给予蒸馏水、蒸馏水、柳氮磺胺吡啶,真人养脏汤、温脾汤,每日一次,共四周。在三个不同治疗时间段(1周,2周、4周),分别在细胞因子、炎性介质、病理变化等几方面探讨温涩法和温下法对实验性UC大鼠的治疗作用和可能的免疫作用机理,具体内容包括: 实验一 温涩法和温下法对UC大鼠一般状况及体重的影响比较研究; 实验二 温涩法和温下法对实验性UC大鼠T淋巴细胞转换率影响的比较研究,用MTT法:先配制大鼠脾细胞悬液,再将浓度为5×10~6/ml的脾细胞悬液加入一块96孔细胞培养板,每孔100ul,加入100ug/mlconA(终浓度为6ug/ml)测T淋巴细胞增殖反应。置5%CO2,37℃培养48h,各轻轻吸弃上清100ul。加入MTT溶液(MTT浓度为0.5mg/ml)10ul,于振荡器上振荡1min。放置5%CO_2,37℃培养箱反应4h,取出反应物,每孔加入0.01NHCL-10%SDSl00ul/孔,振荡,37℃过夜,次日在酶标光度计570nm处读取A值。 实验三 温涩法和温下法对实验性UC大鼠循环免疫复合物影响的比较研究,运用聚乙二醇沉淀比浊法:用微孔塑料板,每一标本用4孔,2个孔作实验孔(T),2个孔作对照孔(C).实验孔中加PEG溶液210ul,对照孔中加缓冲液210ul,然后每孔加待测血清7ul,(PEG最终浓度为36.8g/1)摇匀后在4℃下过夜,次日用缓冲液作空白对照于492mn测各孔OD值,取2孔平均值A(x),按下式计算: 检测浊度值:(TAX-CAX)×10~2 实验四 温涩法和温下法对UC大鼠Th1/Th2影响的比较研究,用ELISA法测定TNBS/乙醇造得的UC模型大鼠经温涩法和温下法治疗后四周内的血清中的Th1 4 温涩法和温下法对渍疡性结肠炎免疫功能影响的比较研究 分泌的NF-Y和ThZ 分泌的几-4,以间接测定ThVThZ 的状态; 实验五 温涩法和温下法对实验性UC大鼠IL亿影响的比较研究,用ELISA法 测得血清及结肠组织中的IL4; 实验六温涩法和温下法对UC大鼠结肠地 影响的比较研究,将约300mg大 鼠结肠组织以150mg加入lml配好的HTAB液中,匀浆后振荡,吸出1M匀浆液,在 10000转/分的冷冻离心机上离心 10分钟.在 96孔板每孔加入 200UI的已配制的显 色液,再加入20ul的上清液,立即在450urn的酶标仪上测定吸光值AI,5分钟后再测 定吸光值AZ,MPO的活性单位=AZ-AI 5 实验七温涩法和温下法对肌大鼠WF-a影响的比较研究,用矾 I SA法; 实验八温涩法和温下法对实验性肌大鼠孤F影响的比较研究,用ELISA法; 实验九 温涩法和温下法对实验性UC大鼠NO影响的比较研究; 实验十温下法和温涩法对实验性UC大鼠结肠组织病理形态学的影响。 3结果 3实验研究结果 3.1温涩法和温下法对UC大鼠一般状况及体重的影响比较研究: *)一般情况:真人养脏汤组:造模后当天与第2天的情况与模型组相似,第二 周全身情况较柳氮磺胺毗唆组和温脾汤组差,一周后恢复程度与柳氮磺胺吮唆组相 似。温脾汤组:各阶段情况与柳氮磺胺毗咬组相似。门)体重:在前两周,在数值 上温脾汤有高于真人养脏汤的趋势。 3.2温涩法和温下法对实验性UC大鼠T淋巴细胞转换率影响的比较研究: 此模型的初期T淋巴细胞转化率是增高的,真人养脏汤和温脾汤相比,真人养 脏汤组的T淋巴细胞转化率始终与正常组相近,温脾汤组的数值较差。由此可见, 真人养脏汤在调节T淋巴细胞转化率方面好于温脾汤。 3.3温涩法和温下法对实验性UC大鼠血清循环免疫复合物(Cr)影响的比较研 究: 在各周模型组与正常组问均无显著性差异 3.4温涩法和温下法对m大鼠mlVTh刁影响的比较研究: 真人养脏汤可能会在 UC急性期使病态增高的 INF-Y下降,且作用略强于温脾 汤。 3.5温涩法和温下法对实验性UC大鼠血清及粘膜中的IL叱影响的比较研究: 温脾汤在 UC急性期可更好的调节 ILJ。 3.2.6温涩法和温下法对肌大鼠结肠MPO影响的比较研究: 。温脾汤组比真人养脏汤可更好的使UC急性期的地 下降。 3.2.7温涩法和温下法对肌大鼠mF-口影响的
【学位授予单位】:北京中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R259.7

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【参考文献】
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