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《北京中医药大学》 2006年
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复方鳖甲软肝片干预气道重塑作用机理的实验研究

姜术霞  
【摘要】: 气道重塑即气道平滑肌的增生肥厚,细胞外基质的异常沉积,上皮下层纤维化等结构的改变,进而引起气道阻力增加,气道弹性降低,顺应性下降等,气道重构是COPD、哮喘主要病理特点之一。干预气道重塑就可以延缓气流受限的发展。实验中以气管内间隔14天、连续两次滴注内毒素的方法来建立气道纤维化模型,然后给予复方鳖甲软肝片干预,观察复方鳖甲软肝片干预气道重塑的疗效并从整体、细胞、分子水平阐明复方鳖甲软肝片干预气道重塑的机理。 方法: 1)健康SD大鼠共120只,分为正常组,假手术组,模型组,复方鳖甲软肝片高,中,低剂量组,醋酸泼尼松组,模型组动物为30只,其余每组15只,除假手术组、正常组外其余各组大鼠采用间隔14天,气管内连续两次滴注内毒素(1mg·Kg-1)的方法来建立动物模型,假手术组大鼠滴注等体积的生理盐水。造模后第28天开始给药。复方鳖甲软肝片高,中,低剂量组分别为1.4g/Kg.d,0.7g/Kg.d,0.35g/Kg.d,醋酸泼尼松组0.56 mg·kg-1·d-1,假手术组,模型组分别灌服等体积的生理盐水。治疗28天后取材,采用ELISA法检测各组动物血清和肺泡灌洗液中TNF-α、IL-8及IL-6含量;检测模型大鼠肺泡灌洗液中细胞总数及分类情况;采用生化分析方法检测肺组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)和羟脯氨酸(HYP)含量;采用放免法检测各组大鼠血清中Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)及层黏连蛋白(LN)和纤粘连蛋白(FN)的含量,同时取肺组织进行HE,Mallory染色并进行图象分析,分析胶原所占全肺面积比及各级细支气管周围上皮下胶原的面积;采用Western-blot法检测各组大鼠肺组织TGF-β1蛋白含量。 2)为进一步明确复方鳖甲软肝片干预气道重塑的机理,采用内毒素(1μg/ml)刺激的人支气管上皮细胞作为细胞模型,用不同剂量的复方鳖甲软肝片药物血清(1.4g/Kg.d,0.7g/Kg.d,0.35g/Kg.d)进行干预24小时,用RT-PCR的方法检测了支气管上皮细胞MMP-9mRNA、TIMP-1mRNA的表达; 3)采用SPSS10.0软件对相关实验数据进行统计学处理,求平均数,作单因素方差分析。 结果: 整体实验: 1.采用间隔14天,气管内连续两次滴注LPS的方法会引起大鼠血清、BALF中IL-8、TNFα含量的明显升高;而应用复方中药治疗后,可以显著降低肺泡灌洗液中IL-8、TNFα含量,也能降低血清中的IL-8、TNFα含量。
【学位授予单位】:北京中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R285

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