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《北京中医药大学》 2006年
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低分子量姬松茸多糖抗肿瘤转移作用及其分子机制研究

刘吉成  
【摘要】:目的 研究LMPAB对肿瘤细胞侵袭能力、血管生成、细胞凋亡和免疫调节的影响,以及对参与肿瘤转移过程的相关基因和蛋白表达的影响,探讨LMPAB抗肿瘤转移作用及其分子机制。 方法 第一部分 LMPAB抗肿瘤转移作用研究 1、LMPAB对人肝癌细胞Bel-7402侵袭能力的影响:5、10和20μg·ml~(-1)浓度的LMPAB与Bel-7402细胞共同孵育48h。重新计数后加入铺有Matrigel Matrix的Transwell培养板上室,下室加入NIH3T3培养上清,孵育24小时后,将滤膜HE染色,光镜下计穿过滤膜的细胞数。 2、LMPAB对小鼠黑色素瘤细胞B16实验性肺转移的影响:C57BL/6小鼠尾静脉注射2×10~5 B16细胞,次日50、100和200mg·kg~(-1)·d~(-1)腹腔注射LMPAB,共14天。第15天处死小鼠,解剖显微镜下计数肺转移瘤灶。 3、LMPAB对双侧肿瘤小鼠模型远端肿瘤的抑制作用:C57BL/6小鼠右侧胁部皮下接种1×10~6和左侧接种2×10~5S180肉瘤细胞建立双侧肿瘤小鼠模型,于3d、4d和5d右侧肿瘤内注射LMPAB。造模后3d、5d、7d、10d、12d、14d、17d、19d和21d,分别测量两侧肿瘤直径。于21d处死小鼠后,称量双侧肿瘤重量。 4、LMPAB对鸡胚绒毛尿囊膜血管生成的影响:于发育第7d的鸡胚绒毛尿囊膜上植入含有LMPAB的微孔滤膜载体,10d后观察鸡胚绒毛尿囊膜血管面积的变化。 5、LMPAB对基质胶诱导的新血管生成的影响:C57BL/6小鼠背部皮下注射含有VEGF、肝素钠和LMPAB的基质胶0.5ml。7d处死小鼠,取出基质胶,称量基质胶重量后,将基质胶固定、包埋并切片,采用CD34标记免疫组化法检测微血管密度。 6、LMPAB对人白血病细胞K562增殖的影响:用5、10和20μg·ml~(-1)LMPAB与K562共同孵育48h后,采用MTT法检测LMPAB对K562生长的影响。 第二部分 LMPAB抗肿瘤转移作用的分子机制 1、LMPAB对肿瘤转移相关基因、蛋白和细胞凋亡的影响:BALR/c小鼠右侧腋窝皮下接种S180,腹腔注射50、100和200mg·kg~(-1)·d~(-1)LMPAB,每天1次,连续7天,给药结束后24h。称量肿瘤;ELISA法检测血清IL-12、IL-18、TNF-α含量;流式细胞仪Annexin-V-FITC/PI双染法检测肿瘤组织细胞凋亡;实时荧光定量PCR法检测肿瘤组织CD44mRNA、MMP-9mRNA表达;免疫组织化学染色法检测脾脏组织INF-γ蛋白表达,肿瘤组织VEGF、nm23-H1蛋白的表达。从而系统评价LMPAB调节免疫、抑制肿瘤生长和抗肿瘤转移作用及其机制。
【学位授予单位】:北京中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:R73-36

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【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
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【参考文献】
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中国博士学位论文全文数据库 前1条
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈辉;桦褐孔菌胞外多糖液体深层发酵及木质纤维素促进产糖效果的研究[D];浙江理工大学;2010年
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9 李劭昱;血浆(1-3)-β-D-葡聚糖检测对肿瘤化疗患者深部真菌感染诊断的研究[D];新疆医科大学;2010年
10 李机;平菇发酵甜高粱秸秆工艺及平菇多糖抗氧化性能的研究[D];新疆农业大学;2010年
【同被引文献】
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中国博士学位论文全文数据库 前2条
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【二级引证文献】
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中国硕士学位论文全文数据库 前2条
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【相似文献】
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中国博士学位论文全文数据库 前4条
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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