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《北京中医药大学》 2007年
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大鼠脑内注射Aβ_(1-40)致海马损伤的炎症相关机制及通络救脑口服液的作用

张晓杰  
【摘要】: 目的观察通络救脑口服液对双侧海马注射Aβ1-40建立的AD模型大鼠学习记忆能力的影响及其干预的分子机制,为该药临床应用提供科学的依据。 方法:鼠龄8~(-1)2周的SD雄性大鼠140随机分为通络救脑口服液低剂量组(12 mg? k g~(-1)?d~(-1))、通络救脑口服液中剂量组(24 mg? k g~(-1)?d~(-1))、通络救脑口服液高剂量组(48 mg? k g~(-1)?d~(-1))、模型组、盐酸多奈哌齐组、假手术组和空白对照组共七组。采用大鼠大脑海马立体定向注射β-淀粉样蛋白1-40建立AD大鼠模型,复制AD模型后第三天通络救脑口服液组、盐酸多奈哌齐组给药干预共28天后检测各项指标。采用Morris水迷宫测试大鼠寻找平台所需时间和通过原平台次数以检测大鼠空间学习记忆能力的变化,取海马组织电镜观察超微结构的变化,采用免疫组织化学染色和计算机图像分析技术测定海马区AChE、ChAT、NF-κB、CRP、NOS和SS蛋白阳性目标积分光密度以检测其表达的变化,应用实时定量PCR法(SYBR? GreenⅠ嵌合荧光法)检测Bax、Bcl-2、APP、BACE1 mRNA表达的变化,采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测血清TNFα和IL~(-1)β含量的变化,采用免疫印迹法检测SYP和caspase-3蛋白含量的变化,采用分光光度法检测了SOD、MDA、MAO酶活性的变化,采用荧光分光光度法检测了脂褐素的含量变化,以及通络救脑口服液对上述指标的影响。 结果: Morris水迷宫实验显示:模型组大鼠在定位航行试验中隐匿平台平均逃避潜伏期较正常组显著延长,空间探索试验中跨越原平台位置次数明显减少(P0.01),通络救脑口服液各剂量组平均逃避潜伏期较模型组显著缩短,跨越原平台位置次数明显增加(P0.01),但与盐酸多奈哌齐组和正常对照组比较差异无显著性(P0.05)。 实时定量PCR结果显示:模型组BACE1 2-ΔΔCt为4.67±0.52 ,2-ΔΔCt显著多于假手术组(1.07±0.08,p0.01),表明模型组BACE1 mRNA表达上调;与模型组比较,盐酸多奈哌齐组(1.80±0.23)、通络救脑口服液低、中、高各剂量组(分别为2.92±0.22、1.54±0.25和0.54±0.11)2-ΔΔCt显著减少,表明BACE1 mRNA表达下调。模型组APP 2-ΔΔCt为5.88±0.70,2-ΔΔCt显著多于假手术组(1.57±0.16,p0.01),表明模型组APP mRNA表达上调;与模型组比较,盐酸多奈哌齐组(3.99±0.52)、通络救脑口服液低、中、高各剂量组(分别为4.24±0.44, 2.93±0.49, 2.53±0.43)2-ΔΔCt显著减少,表明APP mRNA表达下调。与假手术组Bax 2-ΔΔCt比较(1.79±0.13),模型组Bax 2-ΔΔCt显著升高(4.17±0.38),差异具有统计学意义(p0.05),表明模型组Bax mRNA表达上调。与模型组Bax 2-ΔΔCt (4.17±0.38)比较,盐酸多奈哌齐组Bax 2-ΔΔCt (3.37±0.37))、通络救脑口服液低、中、高各剂量组Bax 2-ΔΔCt (2.52±0.68、1.89±0.38、1.58±0.22)显著降低,表明Bax mRNA表达下调;与假手术组Bcl-2 2-ΔΔCt(0.52±0.10)比较,模型组Bcl-2 2-ΔΔCt(0.12±0.02)明显降低,表明模型组Bcl-2 mRNA表达下调,差异具有统计学意义(p0.05)。而盐酸多奈哌齐组Bcl-2 2-ΔΔC(t0.14±0.03)、通络救脑口服液低、中、高各剂量组Bcl-2 2-ΔΔC(t0.16±0.03、0.29±0.04、0.31±0.05)显著升高,表明Bcl-2 mRNA表达上调。 免疫组化实验结果显示:与假手术组比较(3.10±0.39),模型组大鼠海马区CRP蛋白表达增高(8.95±0.57) ) (p0.05),与模型组比较,通络救脑口服液低、中、高各剂量组CRP蛋白表达(分别为6.36±0.53, 5.57±0.34, 4.76±0.31)显著降低(P0.05)。与假手术组比较(3.01±0.19),模型组NF-κB蛋白表达增高(6.90±0.80) ) (p0.05),与模型组比较,通络救脑口服液低、中、高各剂量组NF-kappa B蛋白表达(分别为5.71±0.49, 4.58±0.34, 4.57±0.35)显著降低(P0.05)。与假手术组比较(5.74±0.39),模型组大鼠海马区NOS1蛋白表达降低(2.38±0.30) (p0.05),与模型组比较,通络救脑口服液低、中、高各剂量组NOS1蛋白表达(分别为3.57±0.30, 3.80±0.24, 4.99±0.31)显著升高(P0.05)。与假手术组比较(8.45±0.97),模型组大鼠海马区SS蛋白表达显著降低(2.99±0.14 ) (p0.05),与模型组比较,通络救脑口服液低、中、高各剂量组SS蛋白表达(分别为4.22±0.20, 5.63±0.25, 5.93±0.30)显著升高(P0.05)。与假手术组比较(6.74±0.47),模型组大鼠海马区AChE蛋白表达显著降低(6.42±0.38 ) (p0.05),与模型组比较,通络救脑口服液24mg/kg/d剂量组和48mg/kg/d剂量组AChE蛋白表达(分别为4.37±0.33, 3.20±0.40)显著降低(P0.05)。与假手术组比较(6.58±0.58),模型组大鼠海马区ChAT蛋白表达显著降低(2.81±0.15 ) (p0.05),与模型组比较,通络救脑口服液低、中、高各剂量组ChAT蛋白表达(分别为3.83±0.22, 4.44±0.23, 4.31±0.28)显著升高(P0.05)。 免疫印迹结果显示:模型组大鼠大脑组织SYP蛋白表达相对值(0.590±0.026)较假手术组(0.936±0.028)明显降低(p0.05),而通络救脑口服液低、中、高各剂量组(分别是0.683±0.037, 0.713±0.036, 0.808±0.050),可上调SYP的表达(p0.01)。模型组大鼠大脑组织caspase-3蛋白表达相对值(2.98±0.17)与假手术组(0.86±0.05)比较明显增高,(p0.05),而通络救脑口服液低、中、高各剂量组蛋白表达相对值分别是2.44±0.19, 1.62±0.16, 1.69±0.11,可下调caspase-3的表达(p0.05)。 生化检测结果显示:模型组大鼠脑组织SOD活性(52.43±3.25 U/h·mg~(-1)·prot~(-1))较空白对照组(69.86±6.52 U/ h·mg~(-1)·prot~(-1))明显降低(p0.05),而这种降低可被通络救脑口服液低、中、高各剂量组(分别是61.48±3.05, 64.04±4.64, 66.99±2.75 U/ h·mg~(-1)·prot~(-1))抑制。模型组大鼠脑组织MDA活性(9.09±0.41 U/h·mg~(-1)·prot~(-1))较空白对照组(5.37±0.65 U/ h·mg~(-1)·prot~(-1))明显升高(p0.05),而这种升高可被通络救脑口服液低、中、高各剂量组(分别是5.71±0.58, 6.39±0.38, 7.12±0.29 U/ h·mg~(-1)·prot~(-1))抑制。模型组大鼠脑组织MAO活性(7.88±0.76 U/h·mg~(-1)·prot~(-1))较空白对照组(5.17±0.33 U/ h·mg~(-1)·prot~(-1))明显升高(p0.05),而这种升高可被通络救脑口服液低、中、高各剂量组(分别是7.07±0.81, 7.13±0.53, 6.36±0.36 U/ h·mg~(-1)·prot~(-1))抑制。模型组大鼠脑组织脂褐素含量(5.42±0.24μg/g)较空白对照组((4.29±0.33μg/g)明显升高(p0.05),而这种升高可被通络救脑口服液低、中、高各剂量组(分别是4.89±0.17, 4.52±0.20, 4.23±0.35 U/ h·mg~(-1)·prot~(-1))所抑制。 双抗体夹心ABC-ELISA法检测结果显示:模型组TNFα、IL~(-1)β含量分别为120.97±7.32和88.54±4.07,TNFα和IL~(-1)β含量显著多于假手术组(TNFα为85.43±6.55 ,IL~(-1)β为68.29±4.37,p0.01),表明模型组TNFα和IL~(-1)β含量升高;与模型组比较,盐酸多奈哌齐组(TNFα为106.86±7.09;IL~(-1)β为71.80±0.23)、通络救脑口服液低、中、高各剂量组(TNFα分别为100.08±9.29、99.97±6.09和85.90±4.40;IL-1β分别为77.56±6.97、77.85±3.81和67.87±2.38)TNFα和IL-1β含量显著减少。 电镜观察结果显示:电镜结果显示模型组大鼠海马变性,通络救脑口服液能改善大鼠海马病理改变。 结论: 1、大鼠大脑海马立体定向注射β-淀粉样蛋白1-40建立的AD大鼠模型,较好的模拟了老年性痴呆的改变,可作为老年性痴呆的动物模型之一。2、通络救脑口服液对拟AD模型大鼠脑内海马组织超微病理改变具有改善作用。3、通络救脑口服液可显著改善拟AD模型大鼠的学习记忆障碍,这可能与它具有提高ChAT、NOS1、SS和synapsin蛋白表达,降低AChE蛋白表达有关。4、通络救脑口服液可抑制促凋亡基因Bax mRNA和caspase-3蛋白表达,促进抗凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达,从而发挥抗神经细胞凋亡的作用。5、通络救脑口服液能增加拟AD大鼠SOD活性,降低MAO和MDA活性,从而具有抗氧化作用,这可能是其发挥抗AD作用的机理之一。6、通络救脑口服液可抑制APP和BACE1的过度表达,从而减少海马Aβ在脑内的沉积。7、通络救脑口服液能抑制血清TNFα和IL-1β的含量,降低大脑海马组织CRP和NK-κB的表达,因而具有抗炎作用,通过抗炎可能是其治疗AD机理之一。
【学位授予单位】:北京中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R285.5

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10 刘宗超;实验性脑出血中NF-κB的作用机制及巴曲酶保护作用的研究[D];吉林大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吴石星;黄精多糖对AD大鼠学习记忆能力和海马细胞凋亡的影响[D];中南大学;2009年
2 宋玉娟;电针对老年性痴呆大鼠海马乙酰胆碱酯酶和海马超微结构的影响[D];黑龙江中医药大学;2005年
3 王嫄;睡眠剥夺对大鼠学习记忆影响的机制及防护措施研究[D];第四军医大学;2007年
4 杨建斌;不同运动强度对大鼠学习记忆能力及海马细胞凋亡的影响[D];东北师范大学;2009年
5 史银飞;熟地杞子炖猪脑对AD小鼠学习记忆能力的影响[D];扬州大学;2010年
6 关慧波;地黄饮子对痴呆大鼠行为学及抗氧化作用影响的研究[D];黑龙江中医药大学;2005年
7 宋文杰;益智合剂治疗老年性痴呆的临床与实验研究[D];山东中医药大学;2001年
8 霍丽;电针“百会”穴对轻度认知功能障碍模型大鼠学习记忆能力及脑内S100β蛋白表达的影响[D];辽宁中医药大学;2008年
9 王威;针刺对老年性痴呆大鼠学习记忆和突触素表达的影响[D];黑龙江中医药大学;2005年
10 宋琳莉;地黄饮子防治老年性痴呆的实验研究[D];黑龙江中医药大学;2006年
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