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《北京中医药大学》 2009年
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苏木提取物的免疫抑制及抗肿瘤作用机制研究

彭新  
【摘要】: 肿瘤是机体在各种致瘤因素的作用下,局部组织的细胞在基因水平上失去对其生长的正常调控,导致克隆性异常增生或凋亡不足而形成的新生物,这种新生物往往形成局部肿块。肿瘤不管是良性还是恶性,也不管是上皮组织来源还是间叶组织来源,本质上都表现为细胞失去控制的异常增殖,这种异常生长的能力除了表现为肿瘤本身的持续生长之外,在恶性肿瘤还表现为对邻近正常组织的侵犯以及经血管、淋巴管和体腔转移到身体其它部位,而这往往是肿瘤致死的原因。 祖国传统医学关于肿瘤发生的病机,历代医家的论述主要包括正气内虚、血瘀痰凝、邪毒内攻等。根据肿瘤患者病理性肿块、疼痛、出血、舌质瘀紫或有瘀点瘀斑,以及晚期面色黧黑、肌肤甲错等临床表现,认为血瘀症与肿瘤关系密切。 近年来,随着分子生物学理论不断深入研究,中医药治疗肿瘤方面的研究进展取得了较为长足的进步,使我们对中药在抑制肿瘤生长,提高机体免疫功能,防止肿瘤转移的分子机制有了初步的认识。中医药对肿瘤的影响也从最初的免疫功能调节研究,发展到了今天的抗肿瘤血管生成研究,诱导细胞凋亡,抑制端粒酶活性等研究。苏木(Caesalpinia Sappan L,CAE)为豆科云实属植物的干燥心材。有行血祛瘀,消肿止痛之功效,中医临床常用于经痛、风湿痛、跌打瘀痛等症。临床上也用于肿瘤的治疗,现代药理学研究表明其具有抗肿瘤、免疫抑制等作用。但其具体的抗癌机制目前仍未知。为此我们用现代医学测试技术,测定苏木醇提取物免疫抑制与对抗肿瘤的作用机制。 本研究的第一部分主要观察苏木不同提取物对小鼠胸腺组织、外周T细胞增殖和产生INF-γ的影响。通过制备苏木不同提取物分别给予灌胃小鼠,取小鼠胸腺称重计算胸腺指数;采用MTT法测定小鼠脾T细胞的增殖能力;用双抗体夹心ELISA法测定T细胞培养上清中产生INF-γ的含量。结果发现苏木不同提取物不仅对胸腺重量具有明显的抑制作用,而且还对T细胞的增殖和产生INF-γ的能力具有明显的抑制作用。其中苏木醇提取物和正丁醇提取物对T细胞的抑制作用较强。 鉴于醇类提取物作用较强,在研究的第二部分主要观察苏木醇提物对人肺癌A549细胞的细胞毒作用和诱导凋亡作用。将苏木醇提物按不同浓度分别同人肺癌A549细胞共同培养,MTT法检测对细胞增殖作用的影响,光学显微镜、细胞膜磷脂酰丝氨酸外翻分析、细胞周期分析观察不同浓度苏木醇提物对人肺癌A549细胞的细胞毒和调亡作用。发现苏木醇提物对人肺癌A549细胞有抑制作用,并呈浓度依赖性;苏木醇提物在诱导细胞发生凋亡外还存在其它形式的细胞死亡方式并对细胞各期均有影响。 经过第二部分体外抗肿瘤实验后,进行体内抗瘤实验。第三部分研究主要观察苏木醇提物对H22腹水瘤细胞抑瘤作用,通过皮下接种H22腹水瘤细胞的方法建立荷瘤惺竽P?用苏木醇提物灌胃处理,观察各组荷瘤小鼠的肿瘤生长情况,采用缺口末端标记法测定肿瘤细胞凋亡指数,免疫组织化学方法测定凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达情况。发现苏木醇提物可抑制H22移植瘤生长,促进瘤体细胞凋亡,降低瘤体细胞Bcl-2/Bax比值;其机制与通过调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达诱导肿瘤细胞凋亡有关。
【学位授予单位】:北京中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R285.5

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