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《北京中医药大学》 2009年
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加味生脉饮方对内毒素休克大鼠脑损伤干预作用机制的研究

吴海燕  
【摘要】: 研究休克发生发展的细胞机制是最终阐明休克本质以及探究休克药物作用机制的关键一环。但以往研究人员大多将注意力集中在外周器官,很少有人研究休克时脑的病理生理改变及脑损伤的机制。而脑是机体功能整合的神经调节器官,脑的功能改变和结构损害将直接关系到其他器官对休克因子的应答反应。本实验应用LPS复制大鼠内毒素休克模型,研究内毒素休克引起脑损伤的分子机制,观察加味生脉饮方与地塞米松对这一过程的影响。 本实验分三部分 第一部分:加味生脉饮注射液对内毒素休克大鼠脑损伤的保护作用 实验分为四组:假手术组、模型组、地塞米松组和加味生脉饮组。 96只健康成年Sprague-Dawley大鼠,体重180-220g。采用静脉注射LPS的方法建立大鼠内毒素休克脑损伤模型。模型成功后10 min给药,假手术组组给予等体积生理盐水。各组分别在1h、2h、3h、6h观察点取造模成功的6只大鼠脑皮层组织,分别测定SOD、MDA、iNOS和脑含水量,观察加味生脉饮方对内毒素休克大鼠脑皮层的影响。 实验结果 1.平均动脉压的动态变化 假手术组动物平均动脉压在实验过程中无明显变化,其余三组在注射LPS后5min MAP下降至实验前基础血压的2/3,10min后MAP进一步下降。不同时间点的加味生脉饮组与地塞米松组比较均无明显差异(P>0.05),并逐渐显示出稳定而持久的阻抑内毒素休克大鼠平均动脉压降低的效应。 2.心率的变化 本实验结果显示假手术组大鼠心率无明显变化;在给三个实验组注射LPS的过程中出现心率暂短下降,随后上升,在90-120分钟左右达到顶峰后,出现持续下降直至观察结束同时观察到存活的大鼠HR下降幅度明显低于死亡者,但四组组间比较均无明显差异(P>0.05)。 3.内毒素休克各组的死亡率 地塞米松组和加味生脉饮组各观察点的死亡率低于LPS模型组(P<0.05),两组组间比较对大鼠内毒素休克死亡率的影响无显著差异(P>0.05)。 4.加味生脉饮方对急性内毒素休克大鼠脑组织含水量的影响 地塞米松组和加味生脉饮组大鼠脑含水量明显小于模型组,统计处理有显著性差异(P<0.01),两组组间比较无显著性差异(P>0.05),说明两种药物均可以明显减轻模型大鼠的脑水肿症状,并在减轻模型大鼠的脑水肿症状上无显著性差异。 5.加味生脉饮方对急性内毒素性休克大鼠脑组织SOD活力及MDA含量的影响 模型组与假手术组相比,MDA含量增加(P<0.05),SOD活力明显降低(P<0.01),而加味生脉饮组和地塞米松组能不同程度的减少MDA生成,提高SOD活力,与模型组相比,有显著性差异(P<0.05~0.01)。 6.加味生脉饮方对内毒素休克时脑皮质中iNOS蛋白表达的影响 假手术组:阳性颗粒表达不明显;模型组:阳性颗粒广泛分布;加味生脉饮组:阳性颗粒接近假手术组;地塞米松组:阳性颗粒明显减少。图像分析结果显示:模型组iNOS蛋白表达显著高于假手术组(P<0.01),分别用加味生脉饮方、地塞米松治疗能抑制iNOS蛋白的表达,与模型组比较有显著性差异(P<0.05~0.01)。 7.内毒素休克大鼠脑组织损伤的病理结构改变 脑组织HE染色可见假手术组脑组织结构清晰,皮层神经细胞排列整齐。神经元胞浆丰富,淡染,胞核居中,核仁清楚。模型组炎性细胞浸润,毛细血管周围间隙增大,部分神经元空泡变性,核固缩,神经元数量有所减少,密度降低,间质疏松呈水肿样。给药组各时间点大鼠脑组织病理变化均有不同程度的减轻。 透射电镜结果表明,休克1小时脑组织无明显改变,休克2—3小时动物血压下降后,在皮质的许多区域可见脑小血管内皮细胞内线粒体水肿,内质网扩张,管腔狭窄。脑微血管周围间隙增加,偶见漏出的红细胞。休克6小时这种变化更加明显。生脉饮加味方可延缓这种病理损害。 实验二加味生脉饮注射液对内毒素休克大鼠脑皮质炎症反应的影响 实验分组及模型复制:同第一部分。 选取大脑中部皮质,制备10%组织匀浆。检测采用双抗体夹心酶标免疫法测定肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1α,按试剂盒说明操作,酶标仪测定。旨在观察加味生脉饮方对内毒素休克时脑组织中肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-1α的影响。 实验结果: 加味生脉饮注射液对内毒素休克大鼠脑组织TNF-α、IL-1α含量的影响 模型组脑组织中TNF-α、IL-α含量较假手术组显著上升,加味生脉饮方和地塞米松均能明显降低IL-1α、TNF-α含量,与模型组相比,有显著性差异(P<0.05)。 实验三加味生脉饮注射液对内毒素休克大鼠脑皮质中ICAM-1、NCAM-1、VCAM-1表达及细胞凋亡的影响 实验分组及模型复制:同第一部分。 采用皮层神经元原位凋亡方法检测细胞凋亡;免疫组化观察皮层神经元ICAM-1、NCAM-1和VCAM-1蛋白表达的变化。 实验结果: 1.加味生脉饮注射液对内毒素休克大鼠脑皮质中ICAM-1、VCAM-1、NCAM-1表达的影响 假手术组:阳性颗粒表达不明显;模型组:阳性颗粒广泛分布;加味生脉饮组:阳性颗粒接近假手术组;地塞米松组:阳性颗粒明显减少。图像分析结果显示模型组ICAM-1、VCAM-1、NCAM-1蛋白表达显著高于假手术组(P<0.01),分别用加味生脉饮、地塞米松治疗能抑制ICAM-1、VCAM-1、NCAM-1蛋白的表达,与模型组比较有显著性差异(P<0.05~0.01)。 2.加味生脉饮方对内毒素休克使脑皮质凋亡细胞表达的影响 假手术组:未见凋亡阳性细胞;模型组:TUNEL阳性染色细胞表达强阳性,可见大量凋亡细胞,其中包括神经元和神经胶质细胞;加味生脉饮组:TUNEL阳性染色细胞表达不明显,接近假手术组;地塞米松组:TUNEL阳性染色细胞明显减少。图像分析分析结果显示:模型组细胞凋亡的数量显著高于假手术组(P<0.01),分别用加味生脉饮、地塞米松治疗能降低细胞凋亡的数量,与模型组比较有显著性差异(P<0.05~0.01)。 结论: 加味生脉饮方具有保护内毒素休克大鼠脑细胞的作用,其机制可能是:加味生脉饮方通过提高SOD活性,减少MDA生成,同时抑制iNOS生成大量NO,以提高机体总抗氧化能力,调节凋亡调控因子,减少神经细胞的凋亡,阻抑急性炎性细胞因子IL-1α和TNF-α的过表达,改善由脑损伤引发的炎症反应并通过降低ICAM-1、VCAM-1、NCAM-1诱导的粘附作用、阻抑了炎细胞浸润,减缓炎症免疫反应,从而减轻神经元坏死程度,起到保护神经元的作用。
【学位授予单位】:北京中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R285.5

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【参考文献】
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