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《北京中医药大学》 2010年
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黄芪对低氧环境下血管内皮细胞生长因子/基质细胞衍生因子-1诱导人骨髓间充质干细胞分化、迁移的干预作用的研究

沈凌  
【摘要】: 目的 自体骨髓干细胞移植是将外周血或骨髓中的干细胞移植到缺血的肢体肌肉或闭塞的血管中,使其分化、形成新生毛细血管,改善甚至恢复下肢血流以达到治疗下肢缺血的目的。如何在下肢缺血缺氧的环境中,提高干细胞向VECs分化和迁移能力,成为研究的重点。目前以黄芪为代表的益气活血中药在中西医结合治疗下肢PAOD方面,发挥了重要作用。本研究模拟人体内低氧环境,研究黄芪和VEGF、SDF-1重要细胞因子对hBMSCs向VECs分化及迁移能力的影响,探讨中药干预的主要靶点、作用时机等关键因素,为临床运用提供科学依据。 方法 1黄芪对低氧环境下VEGF诱导hBMSCs分化的干预作用的研究 随机将hBMSCs分为七组,分别为VEGF+常氧组、黄芪+常氧组、VEGF+黄芪+常氧组、低氧对照组、VEGF+低氧组、黄芪+低氧组、VEGF+黄芪+低氧组。将常氧三组置于普通C02细胞培养箱(21%02)中;低氧四组置于三气培养箱(5%O2)中培养。培养7天后,免疫细胞化学法检测CD34、CD31、vWF、VEGFR-2. HIF-la标记物。 2 AMI对低氧条件下SDF-1诱导hBMSCs迁移的干预作用的研究 随机分为7组,分别为SDF+常氧组、黄芪+常氧组、SDF+黄芪+常氧组、低氧对照组、SDF+低氧组、黄芪+低氧组、SDF+黄芪+低氧组共七组。将hBMSCs细胞悬液放入Transwell系统的上室,将含不同药物的细胞培养液加入到Transwell系统的下室中。将常氧三组Transwell系统置于普通CO2细胞培养箱(21%02)中;低氧四组Transwell系统置于三气培养箱(5%O2)中培养。培养48h后,取上室,酒精棉球擦掉上室膜上未迁移的细胞,95%酒精固定10min,苏木素染色5min,随机选择3个连续显微镜视野(×200)计数迁移到上室膜下的细胞,取平均数。 结果 1黄芪对低氧条件下VEGF诱导hBMSCs分化的干预作用的研究 (1)CD34阳性率(%) 1)在常氧培养三组中,VEGF+黄芪+常氧组与其他两组相比较,显著升高(p0.01,p0.05)。 2)在低氧培养四组中,VEGF+黄芪+低氧组与其他三组相比较,显著升高(p0.01,p0.05);低氧对照组与其他三组相比较,显著降低(p0.01)。 3)常氧和低氧相对应组间比较,低氧各组显著升高(p0.01)。 (2)CD31阳性率(%) 1)在常氧培养三组中,VEGF+黄芪+常氧组与其他两组相比较,显著升高(p0.01)。 2)在低氧培养四组中,VEGF+黄芪+低氧组组与其他三组相比较,显著升高(p0.01);低氧对照组组与其他三组相比较,显著降低(p0.01,p0.05)。 3)常氧和低氧相对应组间比较,低氧各组显著升高(p0.01,p0.05) (3)vWF阳性率(%) 1)在常氧培养三组中,VEGF+黄芪+常氧组与其他两组相比较,显著升高(p0.01)。 2)在低氧培养四组中,VEGF+黄芪+低氧组与其他三组相比较,显著升高(p0.01);低氧对照组组与其他三组相比较,显著降低(p0.01)。 3)常氧和低氧相对应组间比较,低氧各组显著升高(p0.01)。 (4) VEGFR-2阳性率(%) 1)在常氧培养三组中,VEGF+黄芪+常氧组与其他两组相比较,显著升高(p0.01)。 2)在低氧培养四组中,VEGF+黄芪+低氧组与其他三组相比较,显著升高(p0.01);低氧对照组与其他三组相比较,显著升高(p0.01)。 3)与VEGF+常氧组相比较,VEGF+低氧组显著升高(p0.05);与黄芪+常氧组相比较,黄芪+低氧组显著升高(p0.01);VEGF+黄芪+常氧组与VEGF+黄芪+低氧组组间无统计学意义(p0.05)。 (5)HIF-1α阳性率(%) 1)在常氧培养三组中,各组间无统计学意义(p0.05)。 2)在低氧培养四组中,各组间无统计学意义(p0.05)。 3)常氧和低氧相对应组间比较,低氧各组显著升高(p0.01)。 2黄芪对低氧条件下SDF-1诱导hBMSCs迁移的干预作用的研究 (1)在常氧培养三组中,SDF+黄芪+常氧组与其他两组相比较,显著升高(p0.01,p0.05)。 (2)在低氧培养四组中,SDF+黄芪+低氧组与其他三组相比较,显著升高(p.01);与SDF+低氧组相比较,低氧对照组显著升高(p0.01);低氧对照组与黄芪+低氧组无统计学意义(p0.05)。 (3)与SDF+黄芪+常氧组相比较,SDF+黄芪+低氧组组间显著升高(p0.05);SDF+常氧组与SDF+低氧组、黄芪+常氧组与黄芪+低氧组组间无统计学意义(p0.05)。 结论 1低氧环境下黄芪可能对BMSCs向VECs分化有促进作用,可能与对HIF-1α和VEGF的影响有关。 2在常氧和低氧环境中黄芪与SDF-1联合使用可促进BMSCs迁移:而在低氧环境中,单独应用黄芪没有明显的促进作用。
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