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《首都师范大学》 2001年
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白菜类蔬菜转基因技术研究:农杆菌介导的离体转化和植株渗入转化

戴大鹏  
【摘要】: 取5种结球白菜的真叶作外植体,实验采用的8种激素配比中,5种基因型 在含6-BA lmg/l、NAA lmg/l、AgNO_3 3mg/l的培养基上均能获得较高的再生率 但基因型间的再生能力有较大差别。对可能影响再生的若干因素作了初步研究, 结果显示基因型是影响再生能力的主要因素;AgNO_3的加入可显著提高再生率, 但在0.5~9mg/l范围内,真叶再生率没有明显变化。取材部位和取材时间对再生 影响不大。 以再生力最高的基因型“10号”为转化材料,利用胭脂碱型根癌农杆菌C58 (Ti质粒含gus A基因)感染真叶外植体,通过组织化学染色法检测gus瞬时表 达,初步确立了预培养3天、共培养2-3天、共培养培养基pH值5.2为最适转 化条件。利用建立好的转化体系,由根癌农杆菌介导转化,将TuMV-NIa及 LMV-CP两种抗病毒基因导入结球白菜,PCR及PCR-Southern杂交证实目的基 因已整合入植物基因组。虽然gus表达率高达60%左右,但最终目的基因的转化 频率仅为0.67%。对二者之间的巨大差异进行了讨论,并提出了解决这一问题的 建议。 通过原位渗入转化小白菜花序切口及花序,从6批筛选的T_1代种子中最终 获得了抗Basta植株。PCR及PCR-Southern杂交证实,目的基因已整合入小白 菜基因组。抽真空过程的去除,使得转化操作更趋于简化,但转化效率有待进一 步研究提高。
【学位授予单位】:首都师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:S634.035.3;S634.034

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