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《首都师范大学》 2003年
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农杆菌介导的白三叶遗传转化体系的建立及优化

赫卫清  
【摘要】: 许多豆科植物中都含有异黄酮类化合物,异黄酮对植物根瘤的形成和植物的防御反应至关重要,但是在牧草白三叶中缺乏这种有益的化合物,因此通过转基因实验将异黄酮合成酶基因导入白三叶中,提高其异黄酮的含量,增加白三叶的营养价值。 在转目的基因前,要首先建立白三叶的遗传转化体系,本论文详细研究了根癌农杆菌A311介导GUS基因转化白三叶的研究方法和影响根癌农杆菌介导的基因转移的各种因素,初步建立并优化了白三叶的遗传转化体系。A311带有pBI121质粒,该质粒携有GUS基因,其启动子为35S启动子,筛选标记基因为nptⅡ。 选用苗龄4~5天的带柄子叶作为外植体,先将外植体预培2天,再与根癌农杆菌A311共培养3~4天后,转入附加有40mg.L~(-1)卡那霉素和400mg.L~1羧苄霉素的再生培养基(MB+1mg. L~(-1)6-BA+0.1mg. L~(-1)NAA+5mg. L~(-1)AgNO_3)上选择培养6周后,子叶柄再生出抗性芽,抗性芽的再生频率达到22.6%。抗性芽在附加有30mg.L~(1)的卡那霉素和400 mg.L~(1)羧苄霉素的生根培养基(1/2MB+0.1 mg. L~(-1)NAA)上继续筛选,长出抗性根,形成完整的转化植株,转化率在6.5%左右。部分转化植株表达有GUS活性。确立的白三叶遗传体系就可以运用到下一步转IFS基因的实验中。
【学位授予单位】:首都师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:Q943

【引证文献】
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【参考文献】
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【共引文献】
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【同被引文献】
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3 陈家武;喷施毒死蜱后苹果树叶及白三叶的安全性评价[D];西北农林科技大学;2011年
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