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《首都师范大学》 2006年
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FDR3和FDR4的细胞定位和功能鉴定

张艳萍  
【摘要】:fdr(Fe-deficiency-related)是从缺铁诱导的玉米根cDNA文库中筛选得到的cDNA克隆,其全长为3.3kb。经过对fdr基因进行广泛的同源性比较,至今没有发现任何同源性序列,经ORF Finder分析发现其包含有两个大小分别为1068bp和648bp的开放阅读框,分别命名为fdr3和fdr4。前人已经将fdr3和fdr4构建到植物表达载体pBI121上,并将标记基因his_6-c-myc epitope构建到fdr3和fdr4之前,形成了带有标记基因的植物融合表达载体T-DNA-his_6-c-myc::fdr3(简写为Fdr3)及T-DNA-his_6-c-myc::fdr4(简写为Fdr4)。 本人将植物融合表达载体Fdr3和Fdr4转化入农杆菌EHA105中,再通过叶盘法转化野生型烟草SRI。通过多次继代,得到具有Kan抗性的植株。利用分子生物学实验技术(PCR-Southem,RT-PCR,分子杂交技术等)对植株进行鉴定,然后将转基因阳性植株植入营养土中培养,收取T_1代种子。对T_1代烟草进行分子水平鉴定,将鉴定为阳性的转基因烟草和野生型烟草进行四种铁营养的水培处理,对比转基因植株和野生型植株在不同铁营养条件下的形态变化,发现它们在叶片形态、根系形态和根的长短粗细等方面无明显区别,只是在叶片的绿色程度上有显著差别,表明叶片中叶绿素的含量不同。以转基因植株为材料,对植株叶片进行亚显微结构的透射电镜观察,发现野生型烟草与转基因烟草中的叶绿体、淀粉粒含量以及叶绿体中的基粒片层结构明显不同。以荧光免疫细胞化学方法分析基因的细胞定位,结果表明两个基因都定位在叶绿体上。通过生物信息学预测到:FDR3蛋白可能定位在叶绿体类囊体区;FDR4蛋白可能定位在膜上;FDR3蛋白没有跨膜结构域,也没有信号肽,是一种可溶性蛋白,它与Ⅲ型分泌系统中FliN蛋白有相似的结构域;FDR4蛋白有4个跨膜结构域,并有信号肽,属分泌性蛋白,它与Ⅲ型分泌系统中FliP蛋白有相似的结构域;它们都含有一些信号转导相关的蛋白激酶磷酸化位点。 猜测FDR3蛋白和FDR4蛋白可能是类囊体膜上的蛋白转运通道中的元件。FDR3蛋白功能与FliN类似,是外界蛋白分子进入膜内的运输通道的开关;FDR4蛋白功能与蛋白运输有关;编码FDR3蛋白和FDR4蛋白的基因可能是早期原核类细菌生物进入到植物体后,随着长期进化而整合到植物基因组中并保留下来的。
【学位授予单位】:首都师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:Q943.2

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【参考文献】
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【共引文献】
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【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【二级参考文献】
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