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《首都师范大学》 2007年
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两株重组酿酒酵母的发酵及一株重组酿酒酵母的初步构建

刘继开  
【摘要】: 日趋紧张的国内外能源局势对以廉价普遍的生物质为原料生产生物燃料乙醇的需求越来越迫切。而成本过高是阻碍发展由木质纤维素稀酸水解液生产燃料乙醇的一个重要因素。其中一个主要的解决办法就是将水解液当中的原本不能够由酿酒酵母发酵的木糖转化成乙醇,从而大幅度的降低成本。因此需要为传统的工业酿酒酵母增加木糖代谢途径。文中前言部分还综合了近期国内外能够代谢木糖的重组酿酒酵母菌的发展概况,以及本实验的目的和意义。 本文首先对重组酿酒酵母YS58-1和YS58-12进行发酵,利用重组酵母YS58-1进行木糖发酵实验,实验结果表明只带有xyl1基因的重组酿酒酵母不能发酵木糖产生乙醇,在有葡萄糖存在时,该重组菌株的木糖利用率接近50%,但是仍然不能发酵木糖产生乙醇,主要产物是木糖醇。重组酵母YS58-12进行木糖发酵实验,结果表明虽然该重组酵母菌能在单独以木糖为碳源的发酵培养基产乙醇,但是推测是酵母提取物当中含有一定量的可发酵糖类。 采用PCR的方法克隆得到休哈塔假丝酵母木糖还原酶基因xyl1,并将该基因连入酵母表达载体pACT2的强启动子ADH下,得到重组表达载体pACT2-xyl1。继而从该质粒上克隆出带有强启动子ADH的xyl1基因。并且讨论了构建过程当中所遇到的大肠杆菌宿主的质粒选择问题。还采用PCR的方法克隆得到酿酒酵母木糖醇脱氢酶基因xyl2,并将该基因连入酵母表达载体pDR195的强启动子PMA1下,得到重组表达载体pDR195-xy12。将pDR195关键的未知序列克隆至已知序列的质粒pYES2上,从而测出该序列。 本实验构建的重组酿酒酵母表达质粒为后续的重组菌的改良奠定了良好的基础。
【学位授予单位】:首都师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:Q78

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