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《首都师范大学》 2009年
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抗逆相关基因的克隆及功能鉴定

杨颖  
【摘要】: 植物在其生长与发育过程中,不可避免的要受到各种不利环境因素的干扰,包括干旱、高盐、低温等非生物逆境胁迫,植物能够感知、传递胁迫信号,诱导相关功能的基因表达,对逆境作出适应性响应。本文以抗逆相关bZIP转录因子(ErABF1和EeABF6),NAC转录因子(ErNAC7),CDPK激酶(EeCDPK)为研究切入点,对四个bZIP、NAC、CDPK基因进行了全长序列的分离和功能研究,具体实验结果如下: 1.采用同源克隆策略及RT-PCR技术,从新疆偃麦草中分别克隆到一个bZIP转录因子基因命名为ErABF1、NAC转录因子基因命名为ErNAC7,从长穗偃麦草中克隆了一个bZIP转录因了基因命名为EeABF6,CDPK转录因子基因命名为EeCDPK。经过进化树和同源树分析,ErABF1和EeABF6与bZIP转录因子中的A亚族具有较高的同源性,属于A亚族成员。 2.在不同时间段用外源激素(ABA)和非生物(干旱、高盐、低温)胁迫处理新疆偃麦草和长穗偃麦草,荧光定量PCR结果显示,新疆偃麦草中的ErABF1和ErNAC7以及长穗偃麦草中的EeABF6和EeCDPK在四种胁迫处理下,表达程度有明显变化。ErABF1在ABA、干旱处理下,表达量先下降后上升,在低温和高盐处理下,表达量先上升后下降:EeABF6在干旱、低温胁迫处理下,表达量呈下降趋势,在高盐处理下不表达,在ABA胁迫处理下,表达量先下降后上升;ErNAC7在干旱和低温胁迫处理下,表达量先下降后上升,在ABA胁迫处理下,表达量下降,在盐胁迫处理下,表达量线上升后下降;EeCDPK在低温、高盐和干旱胁迫处理下,表达量先下降后上升,在ABA、干旱胁迫处理下,表达量下降。这四个基因的表达量在四种逆境胁迫下都有所变化,说明和逆境胁迫诱导相关。 3.将四个基因(ErABF1、EeABF6,ErNAC7和EeCDPK)分别构建了pBI121-35S和pBI121-29A植物表达载体,通过农杆菌介导的方法转化到烟草中。将转ErABF1基因烟草和转EeABF6基因烟草以及野生型烟草在分别含200 mM NaCl以及2%PEG的MS培养基胁迫四周后,转基因植株生长良好,而野生型不能存活:将转ErNAC7基因烟草和转EeCDPK基因烟草以及野生型烟草在含200 mM NaCl的MS培养基胁迫四周后,转基因植株生长良好,而野生型不能存活。上述结果初步证明:ErABF1和EeABF6基因具有耐旱、耐盐的功能;ErNAC7基因具有耐盐的功能,EeCDPK基因具有耐旱的功能。
【学位授予单位】:首都师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:Q943.2

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