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《中央民族大学》 2013年
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荭草苷抗MIRI作用中的自噬机制研究

王慧晔  
【摘要】:第一部分荭草苷预防心肌缺血再灌注损伤的实验研究 目的:建立大鼠离体心脏缺血再灌注模型,研究荭草苷(orientin, Ori)对心肌血再灌注损伤(myocardial ischemia reperfusion injury, MIRI)的预防性作用,旨在为Ori的开发研究提供实验依据。 方法:70只雄性wistar大鼠随机分为7组:对照组(Con)、模型组(Mod)、白藜芦醇组(Res)、荭草苷小剂量组(1mg/kg Ori)、中剂量组(2mg/kg Ori)和大剂量组(4mg/kg Ori),另设荭草苷+自噬抑制剂组(2mg/kg Ori+Wortmannin15μg/kg,OW)。腹腔注射给药7天,实验开始前30min腹腔注射自噬抑制剂。建立Langendorff离体心脏缺血再灌注模型,采用16道生理记录仪采集血流动力学指标;自动生化分析仪检测灌流液乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase, LDH)和肌酸肌酶同工酶(creatine kinase-MB,CK-MB)活性;光镜观察大鼠心肌组织病理学改变;电镜观察大鼠心肌组织超微结构变化。 结果:1.缺血再灌注能引起大鼠血流动力学参数明显变化,再灌注120min后模型组大鼠冠脉流量(coronary flow, CF)、左室发展压(1eftventricular developed pressure, LVDP)、左室内压最大上升速率(dp/dtmax)、左室内压最大下降速率(-dp/dtmax)均有不同程度下降,与对照组相比具有统计学差异(P0.01);再灌注120min后模型组大鼠心脏灌流液中LDH及CK-MB漏出率显著升高,与对照组比较有统计学差异(P0.01);光镜下观察心肌组织切片,模型组大鼠心肌细胞肥大肿胀,细胞间质严重水肿,肌纤维排列紊乱,大量心肌纤维溶解断裂等;电镜下观察到模型组大鼠心肌细胞中肌丝排列紊乱,肌原纤维溶解断裂,线粒体肿胀,嵴密集度降低且排列紊乱。 2.预防性腹腔注射Ori连续7天,可改善再灌注120min后大鼠的血流动力学参数,腹腔注射4mg/kg Ori可使CF从(6.15±1.27) mL/min升高至(8.20±1.72) mL/min,与模型组比较有统计学意义(P0.05);腹腔注射2mg/kg Ori及4mg/kg Ori可使LVDP由(32.73±6.71)mmHg分别升高至(47.32±8.77) mmHg和(46.52±9.50) mmHg,与模型组比较有统计学差异(P0.01和P0.01);腹腔注射2mg/kg Ori及4mg/kg Ori可使+dp/dtmax由(1373.58±371.31)mmHg/s分别升高至(2127.41±314.25)mmHg/s和(1986.76±348.08)mmHg/s,比较结果有统计学意义(P0.001和P0.01);腹腔注射2mg/kg Ori及4mg/kgOri可使-dp/dtmax由(-677.76±107.42)mmHg/s分别升高至(-956.30±186.71) mmHg/s和(-951.26±192.17)mmHg/s,与模型组比较有统计学差异(P0.01和P0.01)。 3.与模型组比较,连续7天预防性腹腔注射Ori可降低再灌注后大鼠心肌灌流液中的LDH和CK-MB水平:再灌注30min后,1、2、4mg/kg荭草苷可使灌流液中的LDH含量从(53.40±7.54)U/L分别降至(18.17±2.56,14.72±1.37和14.22±1.49)U/L,比较结果具有显著性差异(P0.001,P0.001和P0.001),使CK-MB水平由(24.58±4.55)U/L分别降至(7.33±0.84,7.87±1.507.40±1.74)U/L,比较结果具有统计学意义(P0.001,P0.001和P0.001);再灌注60min后,1、2、4mg/kg荭草苷可使灌流液中的LDH含量从(42.50±6.53)U/L分别降至(10.33±1.41,9.50±0.71和10.72±0.80)U/L,比较结果具有统计学差异(P0.01,P0.05和P0.01),使CK-MB含量由(14.28±2.22)U/L分别降至(3.97±1.27,4.08±0.96和6.08±1.47)U/L,比较结果具有统计学意义(P0.01,P0.01和P0.01);再灌注120min后,1、2、4mg/kg荭草苷可使灌流液中的LDH含量从(83.75±10.12)U/L分别降至(13.83±0.83,14.56±0.51和15.06±1.83)U/L,比较结果具有统计学差异(P0.01,P0.01和P0.01),使CK-MB含量由(29.30±4.01)U/L分别降至(5.67±0.47,7.33±1.54和6.87±1.86)U/L,比较结果具有统计学意义(P0.01,P0.01和P0.05)。 4.与2mg/kg荭草苷组比较,加用自噬抑制剂、Vortmannin后再灌注120min的LVDP及±dp/dtmax数值均低于2mg/kg荭草苷组,比较结果具有统计学意义(P0.01),灌流液中的LDH及CK-MB含量均高于2mg/kg荭草苷组,比较结果具有统计学意义(P0.001)。 5.与模型组比较,HE染色切片下观察发现,荭草苷可减轻MIRI大鼠心肌纤维变性坏死以及细胞水肿的程度;电镜观察到荭草苷组心肌结构损伤程度减轻,肌原纤维排列较为整齐,肌节完整清晰,改善线粒体肿胀及嵴紊乱现象。 结论:荭草苷能明显改善大鼠离体心脏MIRI的血流动力学指标、心肌酶LDH及CK-MB漏出率及心肌病理损伤程度,对MIRI具有良好的预防性作用。自噬抑制剂Wortmannin明显减弱了荭草苷的心肌保护作用。 第二部分荭草苷通过AMPK-mTOR途径抗心肌缺血再灌注损伤的自噬机制研究 目的:探讨荭草苷对大鼠离体心脏缺血再灌注损伤心肌组织中自噬水平以及mTOR的影响,为荭草苷防治心脏缺血再灌注损伤提供实验依据。 方法:建立大鼠离体心脏缺血再灌注模型,取左心室进行心肌组织匀浆,采用蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测LC3(Microtubule-associate Protein1Light Chain3,自噬基因微管相关蛋白1轻链3)、mTOR (mammalian target of rapamycin,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白)及AMPK (AMP-activated kinase, AMP活化蛋白激酶)的蛋白表达及磷酸化水平,并采用凝胶分析系统进行分析;电镜观察左心室组织中自噬体的形态。 结果:1.与对照组相比,模型组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高(P0.01)、 p-mTOR Ser2448/mTOR比值降低(P0.01)、p-AMPK Thr172/AMPK比值升高(P0.01)。 2.腹腔注射1、2、4mg/kg荭草苷可使LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值从(0.58±0.12)分别升至(0.71±0.11,0.74±0.17和0.81±0.13),比较结果具有显著性差异(P0.05,P0.05和P0.01);可使p-mTOR Ser2448/mTOR比值从(0.17±0.02)分别降至(0.13±0.03,0.12±0.01和0.11±0.02),比较结果具有显著性差异(P0.01,P0.01和P0.01);可使p-AMPK Thr172/AMPK (?)匕值从(0.26±0.03)分别升至(0.33±0.03,0.35±0.04和0.38±0.05),比较结果具有显著性差异(P0.05,P0.01和P0.01)。 3.与2mg/kg Ori相比,加用自噬抑制剂后导致LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低(P0.01)、p-mTOR Ser2448/mTOR比值升高(P0.01)、p-AMPK Thr172/AMPK比值降低(P0.01)。 4.电镜观察发现,各组中均可以观察到处于不同时期的双层膜包裹的自噬体结构。 结论:荭草苷可以上调大鼠离体MIRI心脏组织中自噬的自噬水平,其机制可能是通过诱导AMPK磷酸化激活并抑制mTOR活化实现的。
【学位授予单位】:中央民族大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:R29

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 罗娅君;肖新峰;王照丽;;大叶金花草化学成分的研究[J];化学研究与应用;2009年01期
2 雷立权,韩启德,高广道,王作贤,卢兴;大鼠左室心肌收缩性能指标的测定[J];生理学报;1982年03期
3 朱福,王美华;植物黄酮类药物在心血管病中的应用[J];心血管病学进展;2001年05期
4 马芹芹;刘立亚;黄秀兰;;Beclin1与mTOR对心肌缺血/再灌注损伤中自噬的交互调控机制[J];心脏杂志;2012年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李超;王乃馨;郑义;陈华;;大叶金花草总黄酮提取物的抗菌活性研究[J];安徽农业科学;2011年08期
2 李红艳;刘劲松;王国凯;林彬彬;王刚;;檵木化学成分研究[J];安徽中医学院学报;2010年02期
3 田鹤邨,尤家騄,韩征平,肖子辉,罗正曜;大白鼠心脏缺血后再灌流的心肌收缩性能变化和心律失常[J];蚌埠医学院学报;1987年02期
4 马伟光;刘亚平;黄之镨;毕云;罗晓东;;雷公藤固态生物转化产物化学成分的初步研究[J];中华中医药杂志;2010年01期
5 郝慧卿,韩启德,伍贻经;关于心肌梗塞后心功能恢复机制的实验研究[J];北京医科大学学报;1990年01期
6 王春艳;;舒血宁注射液对2型糖尿病患者血液流变学的影响[J];当代医学;2009年32期
7 龚剑平,龚彦德,刘菊芳,张永胜;马氏钳蝎蝎毒对大鼠左心室功能的影响[J];第一军医大学学报;1992年03期
8 张阳,侯著法,荣烨之;压力超负荷性心肌肥厚的血液动力学研究[J];湖北民族学院学报(医学版);2000年03期
9 王宪;韩启德;郝慧卿;黄秉庄;;黄腐酸对实验性心肌梗塞时梗塞范围及左室心肌收缩性的影响[J];江西腐植酸;1984年03期
10 车建鹏;晏浩;徐建军;;GSK-3β参与心肌缺血中细胞程序性死亡的研究进展[J];广东医学;2012年10期
中国重要会议论文全文数据库 前3条
1 Sheng-nan Wei;Li Chen;;Different regulation of Berberine via regulation of adenosine-5'-monophosphate kinase activity in both non-ischemic and ischemic areas of the rat heart[A];第十一届全国博士生学术年会(生物医药专题)论文集(下册,墙报P25-P48)[C];2013年
2 Jianbin Zhang;Rui Cao;Tongjian Cai;Michael Aschner;Fang Zhao;Ting Yao;Yaoming Chen;Zipeng Cao;Wenjing Luo;Jingyuan Chen;;The role of autophagy dysregulation in manganese-induced dopaminergic neurodegeneration[A];第十一届全国博士生学术年会(生物医药专题)论文集(中册,墙报P1-P24)[C];2013年
3 鲁倩倩;陈同洋;秦鹏钧;姜学军;;真菌次级代谢产物Rasfonin(A304)引起细胞死亡机理研究[A];中国菌物学会第六届会员代表大会(2014年学术年会)暨贵州省食用菌产业发展高峰论坛会议摘要[C];2014年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李皓;异丙酚后处理对抗心肌缺血的促生存效应机制研究[D];第二军医大学;2011年
2 李向东;缺血预适应、辛伐他汀和通心络减轻猪急性心肌梗死再灌注后心肌无再流和再灌注损伤的机制研究[D];北京协和医学院;2011年
3 张昱;PJ-34对心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其抗氧化应激损伤的机制研究[D];浙江大学;2011年
4 徐强;高糖诱导血管内皮功能障碍的分子机制及白藜芦醇的干预作用[D];第三军医大学;2010年
5 郑芳;两种小分子化合物调节自噬及其相关生物学功能的研究[D];中国科学技术大学;2012年
6 王光明;缺血后处理对缺血再灌注后海马CA1区神经细胞内蛋白聚集的影响[D];吉林大学;2013年
7 汤喜兰;广枣抗心肌缺血再灌注损伤的物质基础及作用机制研究[D];北京中医药大学;2013年
8 郑慧芬;自噬在系统性炎症所致黑质多巴胺神经元损伤中的作用及机制研究[D];苏州大学;2013年
9 杨爱民;Neuronostatin对痛觉、胃肠运动和情绪的影响及脂基化蛋白LC3-Ⅱ的半合成[D];兰州大学;2013年
10 黄星;凋亡抑制蛋白XIAP抑制自噬促进肿瘤形成的作用机制研究[D];中国科学技术大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 胡爱平;Resveratrol对高糖状态下大鼠肾小球系膜细胞增殖及TGF-β1、AMPK磷酸化表达的影响[D];南京医科大学;2009年
2 李波;毛序花楸化学成分的提取分离及其生物活性研究[D];浙江工商大学;2011年
3 李琳;白藜芦醇抑制兔动脉粥样硬化炎症反应的实验研究[D];昆明医学院;2011年
4 窦健霖;白藜芦醇对动脉粥样硬化兔的抗氧化作用研究[D];昆明医学院;2011年
5 杨犇;核桃花絮成分及花絮与核桃叶挥发性成分的对比研究[D];兰州大学;2011年
6 祁玉婷;急性高原缺氧损伤模型的建立及脑线粒体差异蛋白表达研究[D];河北医科大学;2011年
7 刘丹妮;荭草苷抗心肌缺血药效评价及机制研究[D];中央民族大学;2011年
8 程晓荣;积雪草中总黄酮提取纯化及抗氧化活性的研究[D];辽宁医学院;2011年
9 齐莹莹;自吞噬对脓毒症乳鼠心肌细胞活性及线粒体膜电位的影响[D];华中科技大学;2011年
10 董瑞红;吴茱萸碱诱导白血病细胞凋亡及其机制研究[D];南方医科大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 郝季兰;醋柳黄酮片治疗老年心血管疾病的评估[J];北京医学;1994年06期
2 王学敏,李尔慧,薛吉沛;醋柳黄酮治疗冠心病心绞痛36例疗效观察[J];北京医学;1994年06期
3 杜绍兴,徐南图,沙立人,张汉京,孟琼,黄燕莎;醋柳黄酮(沙棘酮)对冠心病患者左心功能的疗效[J];北京医学;1994年06期
4 卜祥雷,宋闽路,黄亚薇;醋柳黄酮片对血流变和血脂的影响[J];北京医学;1994年06期
5 陶晨,杨小生,罗载刚,陈明,陈金秀,邓先扩;乌蕨中抑菌活性成分核磁共振波谱分析[J];贵阳医学院学报;2004年06期
6 李钦章,陈小佳;山楂叶中黄酮甙对离体蛙心的作用[J];暨南大学学报(自然科学与医学版);1996年03期
7 雅达心达康治疗小组;雅达心达康治疗冠心病心绞痛的疗效观察[J];临床心血管病杂志;1995年03期
8 李云霞,黄倩霞,刘莉,周铁军;关于左室等容收缩相心肌收缩性能指标的实验研究[J];生理学报;1980年02期
9 于晓江,刘传镐,李孝光,臧伟进,张社团;沙棘总黄酮对离体血管平滑肌的作用[J];西安交通大学学报(医学版);1990年04期
10 高其铭,袁秉祥,赵苏玉,李生正,刘次伯;淫羊藿总黄酮对家兔血液流变学指标的影响[J];西安交通大学学报(医学版);1992年03期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 高增平;绵马贯众有效成分的研究[D];北京中医药大学;2003年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 卢伟;范慧敏;刘中民;;Genistein预处理对体外循环MIRI的保护作用[J];同济大学学报(医学版);2007年05期
2 ;[J];;年期
3 ;[J];;年期
4 ;[J];;年期
5 ;[J];;年期
6 ;[J];;年期
7 ;[J];;年期
8 ;[J];;年期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 徐俊;吴宥熹;刘立亚;孙秀玉;黄秀兰;;荭草苷对大鼠MIRI的作用与线粒体自噬关系研究[A];第十二届全国脂质与脂蛋白学术会议论文汇编[C];2014年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 王慧晔;荭草苷抗MIRI作用中的自噬机制研究[D];中央民族大学;2013年
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