收藏本站
《南开大学》 2017年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

miR-200b-3p抑制对足细胞TRPC6通道及BK_(Ca)通道的影响

尹红强  
【摘要】:成熟的足细胞,也称肾小球上皮细胞,是依附于肾小球基底膜(glomerular basement membrane,GBM)的高度分化的细胞。足细胞由胞体、主突及足突3部分组成,由于其特殊的结构,与肾小球基底膜一起构成了肾小球血液滤过屏障,对于阻止蛋白丢失起到重要作用。近来,越来越多的实验证明许多肾脏疾病的发生及发展与足细胞的损伤及功能的异常有密切的联系。microRNA(miRNA)是一类内源性单链非编码RNA分子,长度约为22个核苷酸。它主要通过与靶基因完全或不完全互补配对结合,进而对mRNA进行翻译抑制或诱导其降解,来调控基因的转录与表达。miRNA在许多物种中均有表达包括植物、动物甚至一些藻类。事实上,一些研究已经表明在足细胞中敲除Dicer或Drosha等对miRNA的产生具有重要作用的酶,会导致蛋白尿及肾小球硬化症~([1]),说明miRNA对于维持足细胞的功能的稳定具有重要作用。miR-200b是miR-200家族中的一员,miR-200b-3p是由小鼠pre-mi R-200b的3’臂剪切加工得到。已有很多研究表明miR-200b-3p对于上皮细胞-间质细胞的转化(EMT)起到重要的调控作用,比如过表达miR-200b-3p可以抑制膀胱癌中上皮细胞到间质细胞的转移~([2])。关于miR-200b-3p的研究大多集中在癌症方面,对于其在肾脏及与肾脏相关的细胞方面的研究却较少。Raman Agrawal等的研究表明miR-200b-3p家族在肾脏中有丰富的表达~([3]);Li等研究表明miR-200b-3p可以通过靶向调控RSAD2来促进足细胞的分化~([4])。所以miR-200b-3p对于维持足细胞的生理功能发挥重要作用。瞬时受体阳离子通道6(TRPC6)是一种可以通透Ca~(2+)的离子通道。已有研究报道TRPC6基因突变会导致局灶节段性肾小球硬化(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)~([5]);并且TRPC6的过渡激活会激活钙调神经磷酸化酶(Calcineurin)进而导致细胞骨架蛋白F-actin的重排,引起足细胞的损伤及蛋白尿的产生~([6])。所以TRPC6对足细胞功能的稳定具有重要作用。大电导钙激活钾通道(BK_(Ca))是一种受胞内Ca~(2+)与膜电位双重调控的离子通道。由于BK_(Ca)与TRPC6通道是在足细胞中共表达的离子通道,所以TRPC6可能为BK_(Ca)的激活提供Ca~(2+)源。并且BK_(Ca)对于调控足细胞内Ca~(2+)的自平衡发挥重要作用。因此,本实验主要研究抑制miR-200b-3p对足细胞TRPC6及BK_(Ca)的影响。实验采用条件性永生化足细胞系(MPC5),分化成熟后,使用全细胞膜片钳技术记录CON组、miR-200b-3p inhibitor组和siRNA CON组足细胞的TRPC6及BK_(Ca)离子通道的电流。主要实验结果如下:1、下调miR-200b-3p抑制了TRPC6通道的电流及蛋白表达:结果显示下调miR-200b-3p抑制了足细胞TRPC6 mRNA转录及蛋白表达水平,并减小了足细胞TRPC6电流幅值。2、下调miR-200b-3p抑制了BK_(Ca)通道的电流及mRNA表达:结果显示下调miR-200b-3p对抑制了足细胞BK_(Ca) mRNA表达转录水平,并减小了足细胞BK_(Ca)电流幅值,使其I-V曲线斜率减小,激活曲线向去极化方向移动。3、下调mi R-200b-3p对足细胞内Ca~(2+)浓度的影响:结果显示,下调miR-200b-3p导致胞内Ca~(2+)浓度下降。4、抑制TRPC6通道对BK_(Ca)通道的影响:结果显示抑制TRPC6通道减小了足细胞BK_(Ca)电流幅值,使其I-V曲线斜率减小,激活曲线向去极化方向移动。综上所述,下调miR-200b-3p抑制了足细胞TRPC6及BK_(Ca)通道的转录水平及蛋白表达,减小了TRPC6及BK_(Ca)通道的电流,并减少了足细胞[Ca]_i,同时实验还发现抑制TRPC6通道会造成BK_(Ca)通道电流的抑制。这说明下调miR-200b-3p抑制TRPC6的电流,使得足细胞[Ca]_i水平下降,这可能减少了BK_(Ca)通道激活所需的Ca~(2+)源,使得BK_(Ca)通道电流抑制。
【学位授予单位】:南开大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R363

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 安宁;杨陈;陶静莉;李尚妹;陈华青;陈孝文;梁东;刘华锋;;二维平面足细胞相对密度测量法[J];中国中西医结合肾病杂志;2010年04期
2 汤曦;吴青;郑春霞;张明超;曾彩虹;张炯;朱晓东;刘志红;;局灶节段性肾小球硬化患者足细胞钙神经蛋白的表达[J];肾脏病与透析肾移植杂志;2010年04期
3 李卫国;李宇宁;;足细胞对损伤的反应[J];临床儿科杂志;2012年11期
4 尚懿纯;曹式丽;窦一田;;足细胞参与局灶节段性肾小球硬化的机制研究[J];安徽医科大学学报;2013年01期
5 成彩联;郑振达;石成钢;刘迅;叶增纯;娄探奇;;晚期糖基化终产物对足细胞整合素连接激酶的影响[J];中国中西医结合肾病杂志;2013年09期
6 成彩联;郑振达;石成钢;叶增纯;刘迅;娄探奇;;晚期糖基化终产物对足细胞内肾素-血管紧张素系统的影响[J];第三军医大学学报;2013年17期
7 康林;杨巧芳;沈敬华;;足细胞在肾小球疾病中的认识进展[J];中国医药科学;2013年23期
8 赵向娅;冯晓蓓;王朝晖;王伟铭;潘晓霞;李晓;任红;陈楠;;尿足细胞及其相关分子在肾小球疾病中的表达[J];中国中西医结合肾病杂志;2009年06期
9 戴厚永;汤日宁;郑敏;倪杰;马坤岭;刘必成;;结缔组织生长因子在高糖诱导的足细胞上皮间充质转化中的作用[J];中国病理生理杂志;2011年12期
10 郑春霞;刘志红;;足细胞与机体免疫系统[J];肾脏病与透析肾移植杂志;2012年04期
中国重要会议论文全文数据库 前3条
1 孙绍军;;足细胞表达的蛋白分子与肾小球损伤[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年
2 曹璐;毛建华;姚盛华;王文静;王大燕;;Cullin-5表达下调对足细胞形态及增值功能的初步影响[A];2011年浙江省医学会儿科学分会学术年会暨儿内科疾病诊治新进展国家级学习班论文汇编[C];2011年
3 赵敬;王颖超;赵宗江;杨美娟;;糖肾平对高糖+LPS刺激足细胞上皮间质转分化的影响[A];第十一次中国中西医结合实验医学学术研讨会论文汇编[C];2013年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 孙煜;神经标志蛋白在足细胞中的表达及其调节作用[D];复旦大学;2013年
2 李艳娇;过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对大鼠足细胞Ⅳ型胶原表达的抑制及作用机制研究[D];山西医科大学;2015年
3 宋志霞;活性维生素D3对糖尿病肾病大鼠足细胞的保护作用及其机制研究[D];东南大学;2015年
4 祁冰雪;DYYG化合物诱导足细胞自噬对PAN肾病的肾脏保护作用[D];吉林大学;2017年
5 方展;醛固酮对足细胞的损伤机制[D];华中科技大学;2009年
6 孙希锋;TRPC6在足细胞损伤中的作用研究[D];华中科技大学;2009年
7 姜华军;CD2AP在足细胞中的生理功能研究[D];华中科技大学;2008年
8 李明珍;线粒体氧化应激与实验性糖尿病肾病足细胞的损伤[D];天津医科大学;2008年
9 刘海梅;地塞米松改善足细胞细胞骨架损伤的分子机制研究[D];复旦大学;2010年
10 陈廷芳;整合素连接激酶在早期糖尿病肾病足细胞转分化中的作用及大黄素对其的干预[D];苏州大学;2015年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 付军明;骨髓间充质干细胞对阿霉素损伤足细胞mTOR的影响[D];福建医科大学;2015年
2 邓金秀;补体片段C3a在足细胞表型转化中的作用[D];福建医科大学;2015年
3 方超;益气养阴消癥通络中药对高糖培养足细胞裂孔膈膜蛋白的影响[D];河北医科大学;2015年
4 王坤;Cdc42信号蛋白在ACTH保护足细胞机制中的作用探讨[D];苏州大学;2015年
5 郑婷娜;藕节对高糖环境下足细胞的保护作用及机制研究[D];山西医科大学;2016年
6 丁海华;小檗碱对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及对足细胞PI3K/Akt通路的影响[D];安徽医科大学;2016年
7 陈晓雯;基于RNAKL/RANK介导NF-κB及MAPK通路研究二环丙化去氢木香烃内酯保护高糖诱导足细胞的机制[D];南方医科大学;2016年
8 左洋洋;氧化低密度脂蛋白通过PTEN/SR-A途径诱导足细胞损伤[D];南方医科大学;2016年
9 徐玄羽;小鼠足细胞特异敲除核因子-κB受体活化因子对蛋白尿的影响[D];南方医科大学;2016年
10 彭睿;miR-30a下调NFATc3抑制足细胞上皮间质转化的研究[D];重庆医科大学;2016年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026