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《南开大学》 2004年
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牛泡沫病毒3026反式激活因子Borf1的特征及作用机制初探

乔文涛  
【摘要】:泡沫病毒基因组成分、生活周期及基因调控方式与传统的反转录病毒区别较大。它的基因转录至少需要两个启动子协同完成,两类启动子的活性都依赖于反式激活因子Tas(transactivator of spmavirus,Tas),同时Tas与其它病毒蛋白共同与宿主细胞因子作用,协调病毒与宿主细胞间的相互关系,决定病毒的感染方式。其作用方式和机制尚不清楚。 本文以牛泡沫病毒中国毒株(Bovine foamy virus 3026,BFV3026)为材料,研究其Tas蛋白(即Borf1)的特征,探索其转录调节的分子机理。本文的工作内容包括以下4部分:(1)通过生物信息学分析,获得有关Borf1蛋白分子进化、生化性质及翻译后修饰等有关数据;(2)对BFV borf1基因转录本进行研究,通过对其不同感染时间转录本数量、启动子使用及剪接方式的追踪,探讨病毒基因表达和复制的调节机制;(3)完成对BFV Borf1蛋白的可溶性表达、精细纯化,为抗体制备提供优质抗原,获得高滴度抗血清,完成目的蛋白的定位及其定位相关序列的界定。同时也为利用结构生物学直观解析其作用机制打下基础;(4)利用哺乳动物细胞双杂交系统,界定BFV Borf1蛋白激活域,加深对Borf1蛋白的认识,为利用酵母双杂交系统筛选Borf1功能相关因子奠定基础。开展Borf1与宿主细胞因子组蛋白乙酰化酶间的相互作用关系研究。 本文通过5′RACE试验首次直接观察到泡沫病毒时序调节中启动子的转换。并发现在BFV 3026的内部启动子近上游存在“神秘”转录起始点,该起始点在泡沫病毒的自然感染进程中发挥作用。在不同感染时间,borf1转录本拼接方式明显不同,暗示存在转录后调控。在原核细胞中可溶性表达Borf-1重组蛋白,并纯化至电泳纯。得到优质抗血清。发现Borf-1蛋白主要定位于细胞核,其入核不是通过简单的被动扩散,而是需要细胞蛋白的辅助,定位相关序列位于羧基端167-249位氨基酸之间。Borf1激活作用存在以下特点:Borf-1激活病毒自身启动子不需要宿主细胞种属特异性细胞因子。其激活结构域为羧基端198-249位氨基酸,其中198-217位氨基酸为最小激活域。Borf1的激活作用机制与细胞组蛋白乙酰化酶相关。
【学位授予单位】:南开大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S852.65

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【参考文献】
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2 张莉,王世珍,刘佳建,刘淑红,陈启民,耿运琪;牛泡沫病毒内部启动子的克隆及功能分析[J];病毒学报;2000年03期
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7 王世珍,张莉,刘佳建,刘淑红,陈启民,耿运琪;牛泡沫病毒两类启动子活性的比较和机制探讨[J];中国病毒学;2000年01期
【共引文献】
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1 刘佳建,王世珍,张莉,乔文涛,陈启民,耿运琪;牛泡沫病毒调节蛋白功能及其在LTR上应答元件的研究[J];病毒学报;2000年02期
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【相似文献】
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1 王健;牛泡沫病毒通过活化细胞NF-κB信号通路促进其转录及复制[D];南开大学;2010年
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