系统性红斑狼疮遗传免疫特征及HLA基因与临床相关性分析
【摘要】:系统性红斑狼疮(SLE)是一种威胁人类生命健康的自身免疫性疾病,其病因未明,其中遗传和免疫因素在SLE发生发展中起着至关重要的作用。本研究主要从SLE的遗传和免疫两方面探讨SLE的发病机制并结合临床分析HLA-DM基因多态性与SLE临床的相关性。研究内容包括以下几部分。
第一部分: HLA-DM基因与SLE发生的相关性分析。首先采用RFLP-PCR技术检测SLE患者HLA-DM基因分型,结果共检出HLA-DMA等位基因型4种,基因型6种;HLA-DMB等位基因型3种,基因型6种;然后分析他们在SLE的分布频率,结果发现,HLA-DMB*0101/0103基因型分布频率在SLE组显著高于健康对照组,提示HLA-DMB*0101/0103基因型可能为SLE的易感基因型。
第二部分:HLA-DM基因与SLE临床的相关性分析。主要包括SLE患者自身抗体、疾病活动性及肾损害的相关性分析。结果显示,①HLA-DMB*0103等位基因型的SLE患者,抗U1-RNP抗体阳性率增高;②HLA-DMB*0102等位基因型的SLE患者较HLA-DMB*0101等位基因型的SLE患者病情更趋于活动,更易有肾损害。③HLA-DMB*0101/0103基因型的SLE患者病情相对稳定,一般情况较好;④HLA-DMB*0102/0102基因型的SLE患者,更易发生肾脏损伤。由此提示HLA-DM基因多态性与SLE患者自身抗体的产生、疾病的活动性及肾脏受累情况均有一定的相关性。
第三部分:SLE与细胞因子异常。用荧光定量RT-PCR和ELISA等方法检测SLE患者细胞因子水平及其mRNA表达,并分析与抗ds-DNA抗体的相关性。结果显示SLE患者PBMC IL-10 mRNA、IL-1 mRNA 8、Fas mRNA的表达量明显高于正常对照组,血清中IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-18浓度均明显高于(IL-2低于)正常对照组,且抗ds-DNA抗体阳性的患者IL-10mRNA、IL-18mRNA、Fas mRNA的表达量和血清IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-18水平明显高于(IL-2低于)抗ds-DNA抗体阴性的SLE患者。
第四部分:SLE与细胞凋亡。采用DNA片段化分析和流式细胞仪测定检测SLE患者淋巴细胞凋亡及其与自身抗体的关系,结果显示SLE患者的外周血淋巴细胞凋亡较正常对照组明显增多,两种以上自身抗体阳性者较一种抗体阳性者,其淋巴细胞凋亡数量明显增多。
【关键词】:系统性红斑狼疮 遗传 免疫 HLA-DM基因 细胞因子 凋亡 【学位授予单位】:天津大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R593.241
【目录】:
- 摘要3-4
- ABSTRACT4-9
- 第一章 文献综述9-22
- 1.1 引言9
- 1.2 系统性红斑狼疮的相关遗传学9-16
- 1.2.1 HLA 基因10-11
- 1.2.2 HLA-Ⅰ 基因与SLE11
- 1.2.3 HLA-Ⅱ 基因与SLE11-12
- 1.2.4 HLA-DM 基因与SLE12-15
- 1.2.5 HLA 与SLE 易感性的机制15-16
- 1.3 系统性红斑狼疮相关免疫学机制16-20
- 1.3.1 SLE 与细胞因子17-18
- 1.3.2 SLE 与细胞凋亡18-19
- 1.3.3 SLE 与凋亡调控基因19-20
- 1.4 本论文的研究思路20-22
- 第二章 HLA-DM 基因多态性与SLE 发生的相关性分析22-37
- 2.1 材料与方法22-27
- 2.1.1 临床资料22-23
- 2.1.2 实验仪器23
- 2.1.3 主要试剂23
- 2.1.4 试剂配制23-24
- 2.1.5 全血基因组DNA 的提取24
- 2.1.6 PCR 扩增反应24-25
- 2.1.7 PCR 产物酶切25
- 2.1.8 10% 聚丙烯酰胺凝胶电泳25-26
- 2.1.9 HLA-DMA、HLA-DMB 各等位基因型结果判读26-27
- 2.1.10 统计方法27
- 2.2 结果27-33
- 2.2.1 红斑狼疮患者HLA-DM 基因分析27-32
- 2.2.2 HLA-DM 基因多态性与系统性红斑狼疮易感性分析32-33
- 2.3 讨论33-36
- 2.4 本章 小结36-37
- 第三章 HLA-DM 基因多态性与SLE 临床相关性分析37-56
- 3.1 材料与方法37-40
- 3.1.1 临床资料37
- 3.1.2 SLE 患者HLA-DM 基因多态性检测方法37
- 3.1.3 SLE 患者自身抗体检测37-38
- 3.1.4 SLE 患者活动性判定38-39
- 3.1.5 SLE 患者肾损害判定39
- 3.1.6 统计方法39-40
- 3.2 结果40-53
- 3.2.1 HLA-DM 基因与SLE 自身抗体相关性分析40-46
- 3.2.2 HLA-DM 基因与SLE 疾病活动性相关性分析46-50
- 3.2.3 HLA-DM 基因与SLE 肾损害的相关性分析50-53
- 3.3 讨论53-55
- 3.4 本章 小结55-56
- 第四章 SLE 与细胞因子异常56-74
- 4.1 材料与方法56-60
- 4.1.1 临床资料56
- 4.1.2 试剂56-57
- 4.1.3 主要试剂配制57
- 4.1.4 总RNA 提取57-58
- 4.1.5 RNA 鉴定58
- 4.1.6 逆转录合成cDNA58
- 4.1.7 实时荧光定量PCR 反应58-59
- 4.1.8 PCR 反应产物特异性鉴定59
- 4.1.9 扩增产物电泳鉴定59
- 4.1.10 ELISA 法测定细胞因子水平59-60
- 4.1.11 实验结果分析方法60
- 4.1.12 统计学方法60
- 4.2 结果60-69
- 4.2.1 SLE 患者外周血单个核细胞IL-10mRNA、IL-18mRNA 和Fas mRNA 表达60-68
- 4.2.2 SLE 患者外周血IL-2,IL-4,IL-10,IL-18, IFN-r 水平68
- 4.2.3 SLE 患者PBMC IL-10 mRNAI、L-18 mRNAF、as mRNA 的表达量与抗ds-DNA抗体关系比较68-69
- 4.2.4 SLE 患者血清 IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-18 水平与抗ds-DNA 抗体关系比较69
- 4.3 讨论69-73
- 4.3.1 IL-10、IL-18、Fas 在系统性红斑狼疮中的作用69-71
- 4.3.2 IL-2、 IFN-γ、IL-4 在系统性红斑狼疮中的作用71-73
- 4.4 本章 小结73-74
- 第五章 SLE 与淋巴细胞凋亡74-78
- 5.1 材料与方法74-75
- 5.1.1 临床资料74
- 5.1.2 主要试剂及配制74
- 5.1.3 淋巴细胞凋亡检测74-75
- 5.1.4 淋巴细胞凋亡与自身抗体关系比较75
- 5.1.5 统计学方法75
- 5.2 结果75-76
- 5.2.1 SLE 患者淋巴细胞凋亡75-76
- 5.2.2 SLE 患者淋巴细胞凋亡与自身抗体关系76
- 5.3 讨论76-77
- 5.4 本章 小结77-78
- 第六章 总结与展望78-80
- 6.1 主要工作总结78
- 6.2 展望78-80
- 参考文献80-87
- 发表论文和参加科研情况说明87-89
- 附录89-91
- 致谢91
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