酶法提取黄芩有效成分研究

【摘要】： 黄芩是我国传统中药,其主要有效成分是黄酮类化合物黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素。目前黄芩主要通过煎煮法、回流法等提取,但这些方法存在有效成分提取率低的问题,因此探寻有效的提取方法对提高黄芩药材的开发应用具有重要意义。 本文研究纤维素酶和果胶酶提取黄芩中的有效成分(黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素)。建立了有效的高效液相色谱条件,流动相甲醇:乙腈:水:乙酸(18:25:57:0.2),流速0.8 mL/min,检测波长275 nm,柱温30℃,可以对黄芩有效成分进行分离。测定了4种纤维素酶和3种果胶酶的水解活性,并确定了最适工作条件。然后以黄芩生药材和炮制药材为原料,通过单因素实验对浸提倍数、加酶量、pH、温度、时间进行考察,再通过正交实验得出纤维素酶和果胶酶法提取的最佳工艺条件。纤维素酶酶解黄芩生药材的最佳工艺条件是浸提倍数20,加酶量25 U/g药材,pH 5.0,温度50℃,时间7 h。果胶酶酶解黄芩生药材的最佳工艺条件是浸提倍数15,加酶量15 U/g药材,pH 4.6,温度50℃,时间7 h。纤维素酶酶解黄芩炮制药材的最佳工艺条件是浸提倍数30,加酶量15 U/g药材,pH 4.8,温度50℃,时间7 h。果胶酶酶解黄芩炮制药材的最佳工艺条件是浸提倍数20,加酶量5 U/g药材,pH 4.2,温度为50℃,时间6 h。 在此基础上对纤维素酶提取、果胶酶提取、水煎提取、超声提取、乙醇回流提取等进行比较。与水煎提取相比,纤维素酶提取黄芩生药材使黄芩苷和汉黄芩苷得率降低了97.0%和84.0%,黄芩素、汉黄芩素得率提高了近6倍和4倍;果胶酶提取黄芩生药材使黄芩苷和汉黄芩苷得率降低了96.8%和80.3%,黄芩素、汉黄芩素得率提高了5倍和3倍多。纤维素酶提取黄芩炮制药材使黄芩苷、汉黄芩苷得率提高了16.3%、23.6%,黄芩素、汉黄芩素得率提高了86.7%、90.9%;果胶酶提取黄芩炮制药材使黄芩苷、汉黄芩苷得率提高了11.7%、11.8%,黄芩素、汉黄芩素得率提高了77.3%、81.8%。