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《天津大学》 2009年
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苹果酸脱氢酶及异柠檬酸脱氢酶扩增对E.coli产琥珀酸的影响

曲洁  
【摘要】: 本文以代谢工程的理论为指导,通过对大肠杆菌代谢途径的分析,选取在厌氧条件下表达活性降低的苹果酸脱氢酶和异柠檬酸脱氢酶,研究其在厌氧条件下对大肠杆菌琥珀酸产量的影响。通过扩增mdh和icd基因并将其分别与表达载体相连,增大苹果酸脱氢酶和异柠檬酸脱氢酶的活性,从而提高琥珀酸产量。主要得到以下结果: 通过Genbank查得苹果酸脱氢酶基因mdh和异柠檬酸脱氢酶icd的基因序列,克隆扩增编码苹果酸脱氢酶的mdh基因片段和编码异柠檬酸脱氢酶的icd基因片段; 利用同源重组连接试剂盒将扩增得到的mdh基因整合到原核表达载体pET28a(+)上,构建了表达mdh基因的质粒pIFmdh; 通过双酶切和连接的手段将扩增得到的icd基因与表达载体pET28a(+)相连,构建得到表达icd基因的重组质粒pIFicd; 将构建得到的重组质粒pIFmdh和pIFicd转入野生型大肠杆菌W1485中,分别构建了重组菌TUC1(pIFmdh)和重组菌TUC2(pIFicd); 对TUC1和TUC2进行发酵,并通过色谱测定重组菌株琥珀酸产量。重组菌TUC1琥珀酸产率达0.22mol/mol葡萄糖,比野生型W1485提高47%;重组菌TUC2琥珀酸产率为0.195mol/mol葡萄糖,比野生型W1485提高30%。
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