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柚子皮多糖抗肿瘤活性研究

王玉芳  
【摘要】:本实验是以柚子皮为原料提取柚子皮多糖,通过正交试验得到柚子皮多糖的最佳提取工艺条件。对提取的多糖进行成分与含量测定,并进行紫外光谱和红外光谱分析,采用气相色谱测定其单糖组成。建立动物模型和细胞模型,探讨柚子皮多糖的体内体外抗肿瘤活性。通过单因素实验与正交试验得到提取柚子皮多糖的最佳提取工艺为:料液比1:40,提取时间1.5 h,提取温度95℃,pH为2,多糖得率最高为17.6%。其中多糖含量为77.01%,并主要由葡萄糖组成。在体外通过MTT法发现多糖对肿瘤细胞几乎没有抑制作用。建立S180肉瘤小鼠模型,用低剂量(100mg·kg~(-1)d~(-1))、中剂量(200mg·kg~(-1)d~(-1))和高剂量(300mg·kg~(-1)d~(-1))灌胃小鼠,发现中剂量抑瘤率最高为50%,表明柚子皮多糖具有较好的体内抗肿瘤效果。从血液和免疫器官两方面来检测柚子皮多糖的抗肿瘤作用。血液指标通过小鼠血常规检查、外周血淋巴细胞亚群测定、小鼠血清Elisa实验、血清抗体免疫荧光实验和血清中IL-2、IFN-γ、TNF-α细胞因子的检测;免疫器官指标包括HE染色观察免疫器官组织形态、研磨液淋巴细胞亚群测定、淋巴细胞增值实验和NK细胞杀伤实验。结果显示多糖可以提高荷瘤小鼠血液中各淋巴细胞亚群的比例,促进肿瘤特异性抗体和细胞因子的分泌;通过小鼠免疫器官(胸腺和脾)的HE染色结果可以看出,多糖可以很好的保护荷瘤小鼠的免疫器官,并维持其良好的形态。胸腺和脾脏研磨液的淋巴细胞亚群检测结果显示,发现多糖可以提高荷瘤小鼠T淋巴细胞的比例,增强淋巴细胞活性。淋巴细胞增殖转化实验和NK细胞杀伤实验结果显示,发现多糖可以促进荷瘤小鼠淋巴细胞的增殖,增强NK细胞的杀伤能力。通过腹腔吞噬中性红实验,发现多糖可以增强荷瘤小鼠腹腔细胞的吞噬能力。通过以上实验,可以得出柚子皮多糖对肿瘤细胞没有直接的杀伤作用,它是通过促进荷瘤小鼠淋巴细胞的增殖、提高免疫细胞的活性、促进抗体及免疫因子的分泌和保护免疫器官等途径,来提高机体细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫能力,从而发挥抗肿瘤作用。


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