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《天津科技大学》 2018年
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黑曲霉中veA及laeA基因功能的研究

陈浩宇  
【摘要】:黑曲霉作为一种重要的工业发酵微生物,广泛应用于食品及酶制剂等生产领域,但是其产生的真菌毒素一直威胁着人类的健康。本文拟研究黑曲霉全局调控因子veA及laeA对赭曲霉毒素A(OTA)的生物合成、菌体的生长发育和氧化胁迫下应激反应的调控作用,这将为有效控制黑曲霉的生长与产毒及进一步探究黑曲霉中网络调控提供理论参考依据。(1)本实验通过农杆菌侵染的方法成功筛选出△veA及AlaeA菌株,通过基因组重测序的方法测定AveA及AlaeA菌株中潮霉素基因插入位置,证实潮霉素基因插入位置正确,插入方式为反向插入,基因拷贝数为1。经稳定性验证,AveA及AlaeA菌株具有良好的遗传稳定性。(2)通过与黑曲霉A14表型特征对比,发现AveA及AlaeA菌株的产孢及菌落生长直径均有不同程度的减少,菌丝长且松散,枝节相对较少,而分生孢子形态无明显差异。(3)通过研究OTA的生物合成量,发现AveA菌株在生长7d过程中均未能检测到OTA,通过qRT-PCR分析OTA合成关键基因pks的表达情况,结果表明pks的表达与黑曲霉A14相比急剧减少;△laeA菌株的OTA合成量与野生菌株相比极大减少,在生长第7 d,光照条件下减少92.45%,黑暗条件下减少99.03%。(4)通过对黑曲霉A14代谢产物OTβ,OTα及OTA的动力学分析,发现OTA、OTα及OTβ在生长3-9d过程中不断增加,其中OTA及OTβ相比OTα增加较为缓慢;此外,黑暗条件下OTα及OTA的相对量明显高于光照条件,在生长第9d时,黑暗条件下OTα的合成量是光照条件下的1.48倍,黑暗条件下OTA的合成量是光照条件下的1.81倍。(5)通过氧化胁迫实验得出黑曲霉A14在遭受氧化胁迫时通过提升毒素的合成及抗氧化酶的活性来平衡胞内多余的活性氧;AveA及AlaeA菌株增加了对H2O2的敏感性,同时在10mMH2O2胁迫条件下被完全抑制;AveA及△laeA突变菌株在应对氧化胁迫时对抗氧化酶的调控作用减弱。
【学位授予单位】:天津科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:Q933

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