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《天津科技大学》 2003年
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鸡卵黄免疫球蛋白的提取及生物活性的研究

王凤彩  
【摘要】: 本论文对蛋鸡在养殖过程中的加强免疫、卵黄中免疫球蛋白的分离纯化条件、免疫球蛋白活性以及免疫蛋鸡的血清、卵黄抗体效价的变化进行了系统的研究,为进一步开发和利用免疫球蛋白作为功能性食品的免疫调节剂提供了条件和依据。 以引起龋齿的病原菌变形链球菌(S.mutan)对蛋鸡进行免疫,前4周对蛋鸡初次免疫,10周起连续加强免疫两次。免疫后每周进行免疫血清的采集和鸡蛋中免疫球蛋白的提取。 确定了水稀释结合冷冻乙醇法提取免疫球蛋白的工艺路线。鸡卵黄液的最佳稀释倍数为V(蛋黄):V(水)=1:8;冷冻乙醇的添加量为溶液总体积的60%;离心条件分别为:1900×g 10℃ 10min和22000×g 4℃ 20min;NaCl溶液的浓度为25mM;纯化浓缩的方法采用SephadexG—15凝胶过滤或透析和聚乙二醇浓缩。 对水稀释结合冷冻乙醇法与葡聚糖硫酸盐法提取免疫球蛋白两种方法进行了比较。经过水稀释结合冷冻乙醇法得到的冷冻干燥样品,水溶性蛋白质是82.75%,水分是17%,灰分极少量,可溶性蛋白质得率为12.6mg/ml蛋黄,可溶性蛋白质含量占总蛋白质量的97%,提纯后一只鸡蛋黄可提取约140mg的抗体。葡聚糖硫酸盐法提取的粗提物中蛋白质含量仅为19.02%,而可溶性蛋白质含量极少。 抑菌实验表明免疫球蛋白对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌有抑制作用。 采用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定免疫球蛋白的纯度及分子量,分离胶浓度为10%。凝胶经考马斯亮蓝染色后出现两条蛋白带,它们的分子量分别为70KD和40KD,这两条蛋白带为免疫球蛋白经SDS-PAGE变性电泳后裂解的两个亚基。凝胶经碱性品红染色后只出现一条蛋白带。 采用酶联免疫吸附法测定免疫蛋鸡的血清、卵黄免疫球蛋白的抗体效价变化曲线及其活性,免疫后血清和鸡卵黄抗体效价均增加,免疫5~8周抗体效价逐步增加且达到最高峰,在第10周加强免疫后产蛋鸡的血清和卵黄抗体一直维持在较高滴度的水平上,保持了较高的抗体活性。
【学位授予单位】:天津科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:TS201.21

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