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《天津科技大学》 2004年
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微生物转化香兰素的初步研究

黄艳凤  
【摘要】:本文对Streptomyces L1936转化香兰素的最佳培养基和培养条件以及发酵液中香兰素、阿魏酸及其它副产物的检测方法等进行了初步研究,并对阿魏酸制备进行了探索性实验。 确定了HPLC法检测发酵液中阿魏酸、香兰素及其它副产物的条件。采用薄层层析定性检测香兰素、阿魏酸,并建立了简便易行的分光光度法检测发酵液中的香兰素。 运用正交设计理论确定了酶预处理黑麦麸皮的最佳条件:耐高温.-淀粉酶量为40μ/g干燥黑麦麸皮,1398蛋白酶为36μ/g干燥黑麦麸皮,糖化酶为400μ/g干燥黑麦麸皮,缓冲液用量为300mL。碱水解提取阿魏酸最佳条件为:氢氧化钠浓度为1.0%,提取温度为60℃,提取时间为6h。加入保护剂后,阿魏酸的提取量可达3.114mg/g黑麦麸皮。将提取物溶液进行减压浓缩后进行香兰素的转化试验,香兰素产量达到0.174g/L。 对菌株Streptomyces L1936的发酵培养基进行了优化:通过单因素试验,研究了不同碳、氮源种类、无机盐对香兰素产量的影响。在单因素试验的基础上,利用响应面分析法优化了培养基中影响香兰素转化的主要因素,通过分析求得葡萄糖(X_1)、酵母膏(X_2)、MgSO_4·7H_2O(X_3)的最佳浓度分别为1.0g/L、1.0g/L、0.2g/L。最终确定Streptomyces L1936的最佳发酵培养基为:葡萄糖1.0g,酵母膏1.0g,MgSO_4·7H_2O 0.2g,Na_2HPO_4 4g,KH_2PO_4 1g,NaCl 0.2g,CaCl_2·2H_2O0.05g,水1000mL,初始pH值为7.4。 对菌株Streptomyces L1936的培养条件进行了优化,确定了最佳接种量为6%;最佳发酵温度为37℃;500mL的挡板三角瓶最佳装液量为50mL;摇床转数为190r/min。对底物阿魏酸的添加方式进行了研究,阿魏酸在菌体生长至稳定期添加效果较好。在摇瓶条件下,确定阿魏酸的初始添加浓度以不超过6g/L为宜。采用分批补料转化法可解除阿魏酸对菌体生长和代谢的抑制作用。采用最佳发酵培养基,以商品阿魏酸为底物,分别在摇瓶和7L发酵罐最佳转化条件下,香兰素产量分别达到7.246g/L和10.51g/L。
【学位授予单位】:天津科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:TQ929

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