收藏本站
《天津科技大学》 2005年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

基因工程菌株里氏木霉合成t-PA发酵条件及r-PA基因在甲醇毕赤酵母中表达的研究

冮洁  
【摘要】:论文首先以基因工程菌株里氏木霉(Trichoderma reesei)为研究对象,对其生物合成组织型纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen activator,t-PA)的发酵条件和发酵动力学进行了研究,并对里氏木霉重组t-PA的分离纯化及其性质进行了探索;然后进行了t-PA突变体的研究,获得了t-PA突变体r-PA基因,并在甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)中进行了表达。 采用稀释平板分离法对基因工程菌株Trichoderma reesei进行了分离纯化,对平板上生长良好的单菌落进行摇瓶液态发酵,以t-PA的酶活力为指标,挑选高产菌株,选得的Trichoderma reesei(8)号菌株t-PA产量最高,且遗传稳定性良好。 对Trichoderma reesei(8)生物合成组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)的代谢调节机制进行了研究。在基础发酵条件下,L-山梨糖、D-蔗糖、可溶性纤维素、CMC、麦芽糖、乳糖和棉子糖等单糖及多糖对t-PA生物合成都有诱导作用,其中L-山梨糖的诱导效果最好,加量以1.0%为宜。葡萄糖及其中间代谢产物对t-PA的生物合成产生分解代谢物阻遏作用。纤维二糖在低浓度时可以促进t-PA的生物合成而在高浓度时对t-PA生物合成起反馈阻遏作用。 应用单因素和正交设计试验法,确定了种子培养基的最佳组成和最佳培养条件。应用正交设计试验法和响应面分析试验法优化出摇瓶分批发酵培养基的最佳组成。通过研究不同发酵条件对t-PA生物合成的影响,获得了最佳摇瓶分批发酵培养条件。优化条件与初始条件的摇瓶分批发酵比较试验结果表明,Trichoderma reesei(8)菌株在优化条件下的t-PA产量(3275.26U/mL)比初始条件下(1.14U/mL)显著提高。 对5L发酵罐上的分批发酵过程进行了分析。选择了适宜发酵条件并以5L发酵罐分批发酵试验数据为依据,采用MATLAB工具软件,利用全局收敛的修正的高斯-牛顿法算法,以误差平方和最小为目标,获得发酵动力学方程待估参数,建立了发酵动力学模型。通过拟合分析证明得到的数学模型误差较小,能较好的反映t-PA的分批发酵过程。 对里氏木霉重组t-PA的分离纯化方法进行了研究,建立了里氏木霉重组t-PA的分离提纯工艺。通过超滤、硫酸铵盐析、Butyl Sepharose 4 F F疏水层析、Sephadex G-25凝胶过滤脱盐、Q-Sepharose F F离子交换层析分离等分离步骤,里氏木霉重组t-PA的比活力由347.78U/mg提高到10619.58U/mg,提纯倍数30.54,活力回收率2.63%。通过SDS-PAGE电泳对各步纯化后样品进行分析,经上述各步将里氏木霉重组t-PA分离为电泳纯。 通过SDS-PAGE纤维蛋白自显影证明了Trichoderma reesei(8)的发酵液中
【学位授予单位】:天津科技大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:TQ920.1

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 冮洁;杜连祥;路福平;姚蕾;于海龙;江成英;曹畅;;培养条件对里氏木霉306菌体形态和t-PA生物合成的影响[J];工业微生物;2005年04期
2 冮洁,杜连祥,路福平,邹亚杰,贾丹丹,姚蕾;里氏木霉(Trichoderma reesei)306产组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)液体发酵条件的优化[J];食品与发酵工业;2004年01期
3 毛连山,宋向阳,勇强,杨富国,姚春才,余世袁;里氏木霉木聚糖酶的分离纯化及其性质[J];南京林业大学学报(自然科学版);2002年06期
4 勇强,徐勇,宋向阳,姚春才,余世袁;分批补料合成纤维素酶扩大试验[J];南京林业大学学报(自然科学版);2004年01期
5 符晓;用里氏木霉(RUT-C30)流加培养生产纤维素酶[J];四川食品与发酵;1997年01期
6 刘超纲,刘飞跃,余世袁;啤酒麦糟诱导里氏木霉生产纤维素酶的研究[J];中南林学院学报;1997年01期
7 余晓斌,具润谟;里氏木霉 Rut C-30 液态发酵法生产纤维素酶[J];无锡轻工大学学报;1998年02期
8 张礼星,石贵阳,徐柔,章克昌;里氏木霉利用麦糟生产纤维素酶[J];食品与发酵工业;1999年03期
9 曹健,郭德宪,曾实,汪晨辉;里氏木霉纤维素酶的纯化和性质[J];食品科学;2003年05期
10 管斌,谢来苏,丁友昉,隆言泉;里氏木霉纤维素酶高产菌株发酵特性的测试[J];中国酿造;2000年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 ;里氏木霉RUTC-30生产半纤维素酶[A];中国造纸学会第九届学术年会论文集[C];1999年
2 周志华;曲音波;王成树;王升跃;赵国屏;;产纤维素酶真菌的基因组研究进展[A];中国菌物学会第五届会员代表大会暨2011年学术年会论文摘要集[C];2011年
3 邹根;石少华;江艳萍;陈玲;张珺;王成树;周志华;;热酸菌(Acidothermus cellulolytics)内切酶E1在里氏木霉(Trichoderma reesei)内的异源表达效率的研究[A];中国菌物学会第五届会员代表大会暨2011年学术年会论文摘要集[C];2011年
4 连小华;杨恬;;tPA对表皮角质形成细胞分层的影响[A];中国细胞生物学学会医学细胞生物学、免疫细胞生物学和发育生物学专业委员会学术研讨会论文摘要汇编[C];2002年
5 连小华;杨恬;;表皮角质形成细胞中Ca~(2+)对tPA分泌的调节[A];中国细胞生物学学会医学细胞生物学、免疫细胞生物学和发育生物学专业委员会学术研讨会论文摘要汇编[C];2002年
6 邢苗;刘刚;汤新;张煜;;里氏木霉纤维素酶系列基因在毕赤酵母中的高效表达[A];中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会论文摘要集[C];2003年
7 邢苗;刘刚;余少文;汤新;张煜;;里氏木霉纤维素酶基因的改造和表达[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年
8 周烈;吴小锋;刘建新;;家蚕生物反应器生产重组里氏木霉内切-β-葡聚糖酶Ⅱ及其生物活性分析[A];中国畜牧兽医学会动物营养学分会第十次学术研讨会论文集[C];2008年
9 严军;杨恬;杨进;;角膜碱烧伤后修复过程中tPA和PAI-2的作用[A];中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会论文摘要集[C];2003年
10 欧阳嘉;严明;孔德翀;许琳;;里氏木霉纤维降解酶系的全基因组解析[A];第三届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(上)[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前4条
1 杨伟中;缺血性脑血管病的诊治进展[N];中国中医药报;2004年
2 ;高活力纤维素酶生产技术 [N];中国化工报;2002年
3 本版搞件采写/见习记者 王长胜;目前最好的血栓病治疗剂——尿激酶原溶栓药即将问世[N];人民政协报;2003年
4 丁学安;注射用基因重组葡激酶获准进入临床[N];中国医药报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 冮洁;基因工程菌株里氏木霉合成t-PA发酵条件及r-PA基因在甲醇毕赤酵母中表达的研究[D];天津科技大学;2005年
2 尹晶;温阳益心活血化痰法对冠心病大鼠纤溶系统的影响[D];黑龙江中医药大学;2006年
3 唐瑜菁;凝血酶激活的纤溶抑制剂与水蛭素对纤溶的影响[D];江南大学;2005年
4 宋杰;组织型纤溶酶原激活剂基因I/D多态性和内皮型一氧化氮合酶基因Glu-Asp298突变与心肌梗塞的相关性研究[D];中国协和医科大学;2000年
5 邹铁;组织型纤溶酶原激活剂(tPA)在坐骨神经损伤与恢复过程中的作用研究[D];复旦大学;2005年
6 赫荣琳;TrATG5基因对里氏木霉生长发育的影响[D];浙江大学;2009年
7 徐世永;慢病毒载体法高效转基因鸡制备技术研究[D];南京农业大学;2007年
8 杭志喜;溶解氧对里氏木霉产纤维素酶的作用与控制[D];南京林业大学;2008年
9 张秋卓;稻草秸秆降解中生物表面活性剂的增效作用及发酵新工艺[D];哈尔滨工业大学;2008年
10 何军;高效木聚糖酶基因工程菌的构建及重组酶酶学性质与功效研究[D];四川农业大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吕丹丹;里氏木霉中表达质粒的构建及中性纤维素酶基因的表达[D];华东理工大学;2012年
2 闫作梅;用于大豆膳食纤维改性的里氏木霉工程菌的构建[D];东北农业大学;2010年
3 胡一飞;里氏木霉纤维素酶基因的克隆及在水稻中的过表达研究[D];安徽农业大学;2010年
4 高宏斌;里氏木霉RUT—C30 β—甘露聚糖酶的诱导表达及其cDNA的克隆[D];内蒙古农业大学;2003年
5 覃玲灵;里氏木霉的紫外诱变和高活性纤维素酶突变株的选育[D];中南林业科技大学;2011年
6 魏雅君;苹果渣纤维生物糖化的影响因子及机理研究[D];西北农林科技大学;2012年
7 陈贤东;利用麸皮生物发酵制备低聚糖的研究[D];合肥工业大学;2010年
8 文静;里氏木霉RutC-30β-甘露聚糖酶基因在大肠杆菌中的外分泌型表达[D];内蒙古农业大学;2004年
9 陈小兵;里氏木霉RUT-C30甘露聚糖酶基因man1在毕赤酵母中的高效表达[D];中国农业科学院;2006年
10 王美花;里氏木霉swollenin在米曲霉中的表达和纯化[D];浙江理工大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026