γ-聚谷氨酸作为药物载体的缓释性能及靶向修饰研究

【摘要】： 顺铂(Cis-dichlorodiammineplatinum,DDP)是临床上应用最为广泛的一种抗癌药物之一。由于顺铂在体内很快会和蛋白结合而失效,且铂半衰期很长,体内毒性大,存在严重肾毒性、因此临床应用受到限制。 本文介绍了制备γ-聚谷氨酸-D-半乳糖酯化衍生物-顺铂复合物[Pdy(γ-glutamicacid)-D-galactose esterifiable derivative-Cisplatin Complex Compound,γ-D~+-DDP]的方法,并考察其生物活性。通过生物发酵获得大分子γ-聚谷氨酸[Poly(γ-glutamic acid),γ-PGA]具有水溶性,生物可降解性,无毒性。利用酸降解得到可以作为药物载体的小分子γ-PGA,分子量为20Kda-70Kda。实验以γ-PGA作为药物载体,DDP作为模型药物,D-半乳糖作为靶向修饰剂。利用MTT法检测γ-D~+-DDP复合物体外抗肿瘤作用;利用HPLC检测其体外缓慢释放游离顺铂效果,同时,复合物的体内靶向分布实验在KM鼠以及建立的H_(22)荷瘤鼠模型中进行。利用乳酸脱氢酶试剂盒,HE组织切片染色,观察脏器受损伤情况;应用RT-PCR检测肾脏损伤情况。 制备的γ-D~+-DDP复合物,该复合物载药率达9.4%-9.8%;体外释放实验表明顺铂可以从γ-D~+-DDP复合物持续而缓慢的释放下来。在8h释放率达到了80%,12h后开始平缓。 MTT毒性分析和HE染色结果均表明γ-D~+-DDP复合物对人肝癌细胞BEL-7402有显著的抑制作用。对于正常的肝肾细胞,同等药物浓度情况下,比游离顺铂毒性要低。 γ-D~+-DDP复合物体内毒性分析与体内抗肿瘤活性结果均表明γ-D~+-DDP的体内毒性明显要比游离DDP低,且具有良好的抗肿瘤活性。荷瘤鼠通过γ-D~+-DDP复合物给药治疗后,平均成活时间延长。此外,当荷瘤鼠给药γ-D~+-DDP复合物7.5mg/kg治疗时,肿瘤被显著地抑制,其中约35%的荷瘤鼠肿瘤基本消失。 γ-D~+-DDP复合物体内靶向性分析结果表明:注射γ-D~+-DDP复合物后,小鼠肝脏中DDP浓度显著增加而肾脏中DDP分布明显减少,减少了肾毒性,肝靶向作用明显。而且通过检测乳酸脱氢酶和透明质酸释放情况,发现γ-D~+-DDP对于小鼠肝脏肾脏保护作用明显,未造成明显的损伤。 因此,γ-D~+-DDP复合物是一种有效的抗肿瘤药物,具有潜在的临床应用价值;生物发酵获得的γ-聚谷氨酸可用于药物载体,赋予药物新的特点。