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《天津科技大学》 2008年
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伏马毒素免疫检测及免疫亲和柱纯化的研究

乔好  
【摘要】: 论文试验中使用戊二醛一步法将伏马毒素与KLH连接,制备伏马毒素的免疫原。用此连接制得免疫原免疫兔子,得到了两种特异性多克隆抗体。分别考察这两种抗体的亲和力,选择特异性较好的1号抗体进行酶联免疫分析和免疫亲和柱的研究。 对酶联免疫分析中多项条件的优化,认为该试验的最佳包被量为1μg/孔,最佳酶标用量为1:12000,在pH值为7.5时,使用1倍PBS作为稀释液可以得到最佳检测效果,该酶联免疫吸附检测的最低检测限IC_(15)为0.18±0.08μg/kg。分别选择玉米、大麦、小麦和燕麦为试剂样品检测的对象,采用稀释与添加掩蔽剂结合的方法,针对不同的样品,分别采取不同的方式有效地消除了基质对ELISA分析结果的影响。随后,分别对上述样品进行了伏马毒素的添加回收试验,结果表明四种谷物的回收率皆在65%-95%之间。为实际应用酶联免疫试剂盒的推出,进行了抗体冻干稳定性试验和酶标抗原以及抗体的稳定性试验,分析结果认为可保证试剂盒在4℃条件下放置6个月仍保持检测性能基本不变。 在完成酶联免疫分析研究并且具备充足抗体的基础上,本论文进行了伏马毒素免疫亲和柱的研究。将伏马毒素多克隆抗体与sepharose-4B偶联,制备了对伏马毒素有特异性吸附的免疫亲和柱。经过测定偶联率进行了洗脱剂、洗脱时间、洗涤剂、ELISA掩蔽剂等方面的研究,并最终以玉米为例,使用免疫亲和柱理想的消除了基质影响。进行低浓度的添加回收试验,回收率为52%-63%。
【学位授予单位】:天津科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:TS207.4

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【引证文献】
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【参考文献】
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