收藏本站
《天津农学院》 2015年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

珠美海棠Mz_2NHX_1基因对拟南芥的遗传转化

张永利  
【摘要】:土壤盐碱化在世界范围内广泛存在,并且随着城市人口不断增长,城市用地逐步增加,不合理种植加之不合理灌溉使土壤的理化性质变差,从而阻碍农业生产的发展。盐害这种非生物胁迫对植物的伤害主要表现在渗透胁迫和离子毒害。植物抵御盐胁迫的过程主要是由Na~+/H~+逆向转运蛋白将胞内过多的Na~+区隔化和外排入液泡实现的。现在最有效的措施是在盐渍化土壤上种植耐盐植物,可治理盐渍化土壤且作用显著。随着生物技术的进步,在深入了解植物耐盐机理的基础上,利用分子生物学手段,利用耐盐基因,提高作物耐盐性,已经成为改良盐渍地的有效途径之一。珠美海棠(Malus zumi)原产于日本北部山区,是三叶海棠和毛山荆子的野生杂交种(孟晓烨等,2009)。1976年引入我国,1981年在天津农学院获得组培苗。该树种具有很强的耐盐碱性,是盐碱地主要绿化树种和优良的苹果砧木,所以,探讨其耐盐碱的分子机理具有重要的意义。本研究以珠美海棠幼苗根系的cDNA为模板,根据珠美海棠耐盐基因NHX_1(GQ503257)的保守序列设计引物,通过RT-PCR扩增得到目的基因全长1865 bp,包含一个1635 bp的开放阅读框,编码544个氨基酸,其核苷酸序列与苹果(GU338395)、玫瑰(KC188664)、杨树(ACU01853)的核苷酸序列同源性分别是95%、93%、91%。其对应的氨基酸序列与玫瑰(BAD93487.1)、大叶补血草(BAB11940)、拟南芥(AAF21755)液泡型Na~+/H~+逆向转运蛋白的氨基酸序列的同源性分别是87%、79%、79%,说明该蛋白是一种定位于液泡膜的Na~+/H~+逆向转运蛋白,该基因属于液泡膜Na~+/H~+逆向转运蛋白基因,我们将其定名为Mz_2NHX_1。通过构建植物表达载体的方法,将目的基因和双元植物表达载体PRI 201-AN-GUS DNA连接,构建了Mz_2NHX_1基因的植物表达载体,通过测序可知构建的表达载体正确。将构建好的Mz_2NHX_1基因的植物表达载体通过农杆菌介导法转化拟南芥,通过卡那霉素(Kan)的抗性筛选,选出抗性植株。GUS组织化学染色法显示抗性植株的叶脉和根部染色比较深,其次是幼叶,在茎部染色最不明显,表明Mz_2NHX_1基因成功导入拟南芥,并在拟南芥中表达。提取转基因拟南芥的DNA,以扩增开放阅读框的P3、P4为引物,用PCR方法扩增出1635bp的条带,初步证明了Mz_2NHX_1基因已经转入拟南芥,得到的抗性植株为转Mz_2NHX_1基因植株。
【学位授予单位】:天津农学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:S685.99;Q943.2

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 王璐平;张永利;孙婷梅;于梦楠;秦家慧;李爱;彭立新;;转Mz_2NHX_1基因拟南芥对盐胁迫的生理响应[J];天津农业科学;2016年11期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 张永利;珠美海棠Mz_2NHX_1基因对拟南芥的遗传转化[D];天津农学院;2015年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026