收藏本站
《天津农学院》 2018年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

转Cry1Ab基因抗虫水稻的检测方法研究

李文  
【摘要】:转基因技术的广泛影响以及在商业化推广中存在着的潜在风险,决定了相关部门需要对转基因生物及产品进行有效跟踪、监控、风险评估和标识。我国实施了对包括大豆、玉米、棉花、油菜和番茄5类转基因作物以及17种产品的强制性定性标识制度,而快速准确高效的转基因产品检测技术与方法标准是标识制度实施的技术前提,是转基因生物及产品安全评价及管理的基础。本研究以一种转Cry1Ab基因抗虫水稻为试验对象,通过引物初步筛选、特异性检测、退火温度及引物浓度优化、方法检出限、方法再现性测试和加工品测试等试验,分别建立了普通PCR定性检测方法、实时荧光定量PCR方法检测方法和二重微滴式数字PCR检测方法。主要研究结果如下:(1)建立了转基因抗虫水稻的普通PCR定性检测方法:试验最终优选的引物组合:上游引物为5’-F4:5’-ATCTGTTTACTCGTCAAGTGTCATCTC-3’,下游引物5’-R1:5’-GCCATGGATTACATATGGCAAGA-3’;最适宜的退火温度为56℃;引物浓度为0.6μmol/L;检测限:不低于0.05 ng的抗虫水稻基因组;方法再现性好,能够检出经高温处理含有1%阳性成分的加工品。(2)建立了转基因抗虫水稻的实时荧光定量PCR方法检测体系:试验最终优选的引物及探针组合为:上游引物5’-QF1:CGACGTAGACGACTC,下游引物5’-QR3:ACGACATATAGGCAAGA,探针5’-QP1:AGCCACTGCGGCTTGATCAA;最适宜的引物和探针浓度分别为1.0μmol/L和0.5μmol/L;标准曲线的相关系数和扩增效率符合我国转基因检测方法标准的要求;能够检测不低于0.025 ng的转基因抗虫水稻基因组DNA;方法再现性好,能够检出经高温处理含有1%阳性成分的加工品。(3)建立了转基因抗虫水稻的二重微滴式数字PCR检测方法:在实时荧光PCR试验优化筛选的引物及探针基础上,通过优化反应体系及反应程序、稳定性试验、特异性试验、引物和探针浓度的优化、退火温度的优化以及定量线性范围范围和LOQ验证的一系列试验,确定最佳引物和探针浓度分别为400n M和200n M;60.4℃为最适宜的退火温度;抗虫转基因水稻特异性序列的定量线性范围在42.8~17000拷贝之间,可定量到为0.05ng的样品;水稻内源基因PLD定量线性范围在26.4~36133拷贝之间,可定量到DNA用量为0.01ng的样品。
【学位授予单位】:天津农学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S511;Q943.2

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈凡冰;邵恩斯;黄志鹏;;用于分子改造的苏云金芽胞杆菌cry1Ab基因的克隆与表达[J];生物技术进展;2013年02期
2 常雪;常雪艳;何康来;王振营;白树雄;;转cry1Ab基因玉米对粘虫的抗性评价[J];植物保护学报;2007年03期
3 王阳阳;林胜;尤民生;;非靶标害虫褐飞虱对转cry1Ab抗虫水稻产量的影响[J];环境昆虫学报;2014年03期
4 金荣愉;崔海峰;俞晓平;叶子弘;;转cry1Ab基因棉花质粒标准分子的构建与分析[J];中国生物防治学报;2013年02期
5 冯翠莲;沈林波;赵婷婷;王俊刚;熊国如;张树珍;;Cry1Ab基因转化甘蔗及转基因抗虫植株的获得[J];热带农业科学;2011年09期
6 谭红;叶恭银;沈君辉;彭于发;胡萃;;转cry1Ab基因抗虫籼稻对非靶标害虫白背飞虱发育与繁殖的影响[J];植物保护学报;2006年03期
7 董亚强;李强;尤民生;林胜;;转cry1Ab抗虫水稻对褐飞虱取食及产卵选择行为的影响[J];福建农林大学学报(自然科学版);2016年03期
8 徐丽娜;常雪艳;何康来;王振营;白树雄;;Cry1Ab敏感和抗性亚洲玉米螟氨肽酶N基因的克隆及序列差异分析[J];农业生物技术学报;2011年01期
9 周 霞;程家安;娄永根;;转cry1Ab基因水稻对非靶标昆虫白背飞虱种群增长的影响[J];昆虫学报;2006年05期
10 何康来;常雪;常雪艳;王振营;Natalie Ferry;Angharad M.R.Gatehouse;;亚洲玉米螟对Cry1Ab蛋白抗性的遗传规律与分子机理[J];植物保护;2007年05期
中国重要会议论文全文数据库 前7条
1 赖凤香;罗举;傅强;张志涛;;转cry1Ab基因抗虫水稻对黑肩绿盲蝽的生物学效应[A];科技创新与绿色植保——中国植物保护学会2006学术年会论文集[C];2006年
2 吴研;王振营;赵长山;何康来;;cry1Ab杀虫蛋白对中华草蛉的影响[A];农业生物灾害预防与控制研究[C];2005年
3 汪海燕;叶庆富;;转cry1Ab基因水稻中毒蛋白在土壤中的吸附解吸和生物降解[A];中国原子能农学会第七次代表大会暨学术研讨会论文集[C];2004年
4 杨旭;李宁;王振营;杨群芳;何康来;;Cry1Ab敏感和抗性亚洲玉米螟HSP 70蛋白基因的克隆及序列分析[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年
5 梁革梅;于天海;于宏坤;吴孔明;郭予元;;亚致死剂量cry1Ab和cry1Ac毒蛋白对二化螟生长发育的影响及其抗性反应[A];农业生物灾害预防与控制研究[C];2005年
6 白耀宇;闫瑞红;王进军;程家安;叶恭银;;稻田休田期Bt水稻Cry1Ab蛋白的降解及对土表三种弹尾虫种群动态的影响[A];植物保护科技创新与发展——中国植物保护学会2008年学术年会论文集[C];2008年
7 林毅;黄志鹏;黄必旺;陈建武;关雄;;PCR及RFLP分析鉴定Bt HG5菌株的cry1Ab基因型[A];全国生物防治暨第八届杀虫微生物学术研讨会论文摘要集[C];2000年
中国博士学位论文全文数据库 前5条
1 徐丽娜;Cry1Ab抗性亚洲玉米螟对不同Bt毒素的交互抗性及其产生的分子机理[D];中国农业科学院;2010年
2 蔚亦沛;水稻基因聚合育种及cry1Ab基因在转基因水稻中的分子标记定位研究[D];山东农业大学;2008年
3 吴志平;二化螟中肠Bt毒蛋白Cry1Ab受体基因的分子生物学研究[D];浙江大学;2002年
4 白耀宇;转Bt基因水稻Cry1Ab杀虫蛋白的环境动态及其对非靶标昆虫的影响[D];浙江大学;2004年
5 李冬阳;用于毒素检测的酶联免疫吸附测定(ELISA)研究[D];浙江大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李文;转Cry1Ab基因抗虫水稻的检测方法研究[D];天津农学院;2018年
2 赵朗旭;转cry1Ab基因水稻对白背飞虱的影响[D];福建农林大学;2012年
3 谭黎霞;抗虫基因Cry1Ab转化海棠花的研究[D];西北农林科技大学;2011年
4 王沛;Cry1Ab基因在夏堇中的表达对其抗虫性影响[D];西北农林科技大学;2013年
5 谭红;转cry1Ab基因抗虫籼稻对非靶标害虫白背飞虱的安全性评价[D];浙江大学;2006年
6 杜振翠;二化螟幼虫中肠蛋白质组学分析及Cry1Ab结合蛋白的鉴定[D];南京农业大学;2012年
7 张伟;转Cry1Ab基因大米内、外源基因在食品加工过程中降解规律研究[D];中国农业科学院;2014年
8 陈小洁;转Cry1Ab抗虫基因玉米的分子生物学研究[D];河南师范大学;2013年
9 常雪;亚洲玉米螟对Cry1Ab的抗性遗传规律及其中肠类钙粘蛋白基因的克隆[D];中国农业科学院;2007年
10 高秀云;转cry1Ab基因抗虫粳稻对褐飞虱生长发育及共生微生物的影响[D];浙江大学;2008年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026