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《天津医科大学》 2013年
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柠檬精油防龋作用的动物实验研究

史艳芬  
【摘要】:目的:天然药物防龋是龋病预防和治疗的重要策略,目前已经成为龋病研究的焦点之一。前期研究证实,LEO (Lemon essential oil, LEO)对常见口腔致龋菌有抑制作用,并且在低于最小抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration, MIC)时仍然具有抑制变异链球菌、远缘链球菌(Streptococcus sobrinus, S. sobrinus)等致龋菌早期粘附、产酸、产胞外多糖等致龋毒力因子的作用。本研究在前期工作的基础上,建立大鼠龋病模型,对LEO及其主要有效成分柠檬烯(Limonene, LIM)的体内防龋效能进行客观评价,为进一步的临床研究提供依据。 方法: 1.水蒸气蒸馏法提取精油,气相-色谱-质谱-数据库联用系统分析其成分。 2.纸片扩散法测定LEO. LIM对S. sobrinus的MIC。 3.LEO及LIM防龋作用的动物实验研究 (1)饲喂Keyes2000#致龋饲料建立大鼠龋病动物模型: (2)实验分组:阳性对照组:洗必泰溶液(Chlorhexidine, CHX,0.12%);阴性对照组:蒸馏水(H20);实验组:LEO乳浊液(LEO,2.25mg/mL即MIC/2);LIM乳浊液(LIM,10.50mg/mL即MIC/2)。 (3)实验过程: 在大鼠接种S. sobrinus第二天,取大鼠唾液,稀释涂平板,连续三天(28天-30天)检测S. sobrinus定植情况。鼠龄31天开始,用不同药物对大鼠进行口腔处理,连续5周,每天2次。64天时,采集大鼠唾液,稀释涂平板,菌落计数,随后,乙醚麻醉处死大鼠,制备牙颌骨标本。 (4)观察指标:以下检测值作为衡量各组防龋效果的指标大鼠唾液中总菌落数、S. sobrinus菌落数;S. sobrinus水平(S. sobrinus菌落数/总菌落数*100%);Keyes记分;激光龋齿诊断仪探测荧光值。 结果: 1.LEO的提取及成分分析: LEO的气相色谱-质谱总离子流色谱图(TIC)中,共检测出100余个色谱峰,鉴定了其中的40个色谱峰,其含量占挥发油总量的93.95%。主要成分是LIM及其衍生物。 2.LEO及LIM对S sobrinus的MIC:LEO对S. sobrinus的MIC为4.50mg/mL;LIM对S. sobrinus的MIC为21.00mg/mL。 3.大鼠唾液中细菌水平: (1)唾液中S.sobrinus菌落数: CHX组LEO组LIM组H20组,其中,CHX组与实验组及H20组相比,差异有统计学意义(P0.05),H20组与其它各组比较差异有统计学意义(P0.05),LEO与LIM组之间差异无统计学意义(P0.05)。 (2)唾液中总菌落数及S. sobrinus菌落数/总菌落数: CHX组LEO组LIM组H20组,其中,CHX组与实验组及H20组相比,差异有统计学意义(P0.05),其余各组间差异无统计学意义(P0.05)。 4.大鼠磨牙Keyes龋齿记分: (1)大鼠磨牙平滑面龋Keyes记分: CHX组LEO组LIM组H2O组,其中,LEO组与CHX组、LIM组之间差异无统计学意义(P>0.05),CHX组与LIM组之间差异有统计学意义(P0.05),H20组与其它各组之间差异有统计学意义(P0.05)。 (2)大鼠磨牙窝沟龋中Keyes记分: 窝沟E级和Dx级龋损Keyes记分中,CHX组LEO组LIM组H20组,其中,LEO组与CHX组、LIM组之间差异无统计学意义(P0.05),CHX组与LIM组之间差异有统计学意义(P0.05),H2O组与其它各组之间差异有统计学意义(P0.05); 窝沟Ds级和Dm级龋损Keyes记分中,CHX组LEO组LIM组H20组,其中,CHX组与实验组及H20组相比,差异有统计学意义(P0.05),H20组与其它各组比较差异有统计学意义(P0.05),LEO与LIM组之间差异无统计学意义(P0.05)。 5.激光龋齿诊断仪探测荧光值: 激光龋齿诊断仪探测荧光值,CHX组LEO组LIM组H2O组,其中,CHX组与实验组及H2O组相比,差异有统计学意义(P0.05),H2O组与其它各组比较差异有统计学意义(P0.05),LEO与LIM组之间差异无统计学意义(P>0.05)。 结论: 1.水蒸气蒸馏法提取获得的LEO,主要成分以烯类化合物为主,占总含量78.85%,主要有:LIM(48.00%)及其衍生物β-蒎烯(17.00%)等。 2. LEO、LIM对口腔主要致龋菌S.sobrinus有生长抑制作用。 3.在大鼠龋病模型中,1/2MIC的LEO、1/2MIC的LIM并不影响大鼠口腔微生态平衡。 4.在大鼠龋病模型中,1/2MIC的LEO、1/2MIC的LIM,均有抑制大鼠光滑面龋和窝沟龋发生的作用。LEO较LIM的抑龋效果明显,说明LIM作为LEO的主要成分,发挥主要作用,我们推断LEO内含有的其它成分与LIM发挥协同作用。
【学位授予单位】:天津医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2013
【分类号】:R781.1

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