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《天津医科大学》 2012年
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调节性T细胞在小鼠脑创伤模型中功能作用的实验研究

周子伟  
【摘要】:研究目的:通过观察分析调节性T细胞在颅脑创伤后的变化情况及其对颅脑创伤(Traumatic Brain Injury,TBI)后神经功能恢复情况的影响,明确其在脑创伤中的功能作用,并初步探讨其潜在的作用机制。研究方法:本实验选用清洁级健康成年雄性C57B1/6小鼠共计184只,按照随机数字表法将其随机分为实验组1(空白对照组,n=46只)、实验组2(假手术组,n=46只)、实验组3(单纯TBI组,n=46只)和实验组4(TBI+CD25抗体组,n=46只)。分组后,我们建立小鼠液压打击颅脑创伤模型,并应用改良神经功能评分法和HE染色,评价其行为学功能和脑组织病理变化。我们应用流式细胞术和免疫组织化学染色技术首先分别观察了各组小鼠(n=30只)的调节性T细胞于伤后1天、3天、5天、7天和14天在外周脾脏和脑组织中的变化情况;其次,通过应用Morris水迷宫技术,在造模后7天时,观察了各组小鼠(n=10只)认知功能的差异;再次,应用伊文思蓝测定了各组小鼠(n=6只)伤后3天的血脑屏障渗透率;最后,我们应用免疫组织化学和TUNEL染色技术检测了各组小鼠脑组织中MPO+中性粒细胞和凋亡细胞的变化情况。研究结果:液压打击后,各创伤组小鼠脑组织HE染色均有典型TBI后病理变化,伤后12小时,各创伤组小鼠间神经功能评分无差异,但随着伤情的渐渐恢复,差异逐渐显现。与实验组2比较,实验组3小鼠脾脏中调节性T细胞的数量于3天时降低(P0.5),5天时达谷底(P0.05),之后有所回升,但仍不能恢复正常;同时巧合的是实验组3小鼠脑组织中的调节性T细胞于3天时出现(P0.05),并于5天时达高峰(P0.05),之后表达减少,但仍有表达;而在实验组4小鼠中,调节性T细胞则无论在脾脏中还是在脑组织中均表达很少。脑创伤后,实验组3和4小鼠的逃避潜伏期明显长于实验组2(P0.05),实验组4小鼠的逃避潜伏期长于实验组3(P0.05),而各组小鼠之间游泳速度无差异(P0.05)。较之于实验组3小鼠,实验组4小鼠血脑屏障损伤更为严重,伊文思蓝渗透率更高(P0.05)。在脑创伤后3天时,MPO+中性粒细胞在脑组织损伤灶周围及坏死组织中大量聚集,凋亡细胞则主要分布在半影区。与实验组3小鼠相比,实验组4小鼠脑组织中MPO+中性粒细胞和凋亡细胞数量均显著增加(P0.05)。实验组1和2小鼠在各项指标检测中均无差异,未见明显依文思蓝渗漏,MPO+中性粒细胞和凋亡细胞数也都表达在正常水平。研究结论:小鼠脑创伤后,调节性T细胞可能会透过损伤的血脑屏障由外周组织进入脑实质,并参与继发性脑损伤的发生发展。它可能通过抑制中性粒细胞的浸润,来缓解血脑屏障的损伤和减少神经细胞的凋亡,从而改善小鼠脑创伤后神经功能的预后。
【关键词】:创伤性脑损伤 调节性T细胞 血脑屏障 炎症 免疫
【学位授予单位】:天津医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R651.15;R-332
【目录】:
  • 中文摘要4-6
  • Abstract6-10
  • 缩略语/符号说明10-11
  • 前言11-14
  • 研究现状、成果11-13
  • 研究目的、方法13-14
  • 对象和方法14-37
  • 实验材料14-17
  • 实验动物14
  • 主要实验装置14-16
  • 主要实验试剂16-17
  • 实验方法17-36
  • 建立小鼠颅脑创伤液压打击模型17-18
  • CD25单克隆抗体注射18
  • mNSS评分评价小鼠伤后行为学损害18-19
  • 流式细胞术测定小鼠脾脏组织Treg水平19-25
  • 小鼠脑组织石蜡切片的制备及染色25-32
  • Tune1染色方法32-34
  • Morris水迷宫检测小鼠认知功能34-35
  • 测定小鼠脑损伤后EB渗透率35-36
  • 统计分析方法36-37
  • 结果37-46
  • 小鼠脑组织形态学观察37
  • 脑创伤后,Treg的变化情况37-40
  • mNSS评分检测行为学功能差异40
  • Morris水迷宫检测小鼠认知功能40-42
  • 脑创伤增加了小鼠血脑屏障渗透率42-43
  • 脑创伤后,各组小鼠海马区脑组织中凋亡细胞数比较43-44
  • 中性粒细胞在TBI后,向创伤区大量浸润44-46
  • 讨论46-50
  • 结论50-51
  • 参考文献51-56
  • 发表论文和参加科研情况说明56-58
  • 综述 调节性T细胞在中枢神经系统损伤中的功能作用58-68
  • 综述参考文献63-68
  • 论文致谢;永恒的记忆68

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