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《天津医科大学》 2014年
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α-黑素细胞刺激素对东莨菪碱诱导的大鼠干眼眼表的保护作用

刘会娟  
【摘要】:研究背景干眼是一种泪液和眼表的多因素性疾病,可引起眼部不适、视觉障碍、泪膜不稳定和眼表损害,并伴有泪液渗透性升高和眼表炎症,是最常见的眼表疾病之一。既往的研究已经表明炎症在干眼的发生、发展中起着关键作用。因此,抑制炎症对于干眼的治疗至关重要。α-黑素细胞刺激素(α-MSH)是阿片-促黑素细胞皮质素原(POMC)在前体激素转换酶作用下释放出的13个氨基酸残基。因其与促肾上腺皮质激素(ACTH)基因序列的前13个氨基酸相一致,故二者具有部分相似的功能。临床研究发现局部应用促肾上腺皮质激素可有效治疗干燥性角结膜炎。既往研究也表明,α-黑素细胞刺激素具有强有力的抗炎作用,并可促进角膜上皮细胞的损伤修复。研究目的通过皮下注射氢溴酸东莨菪碱建立大鼠干眼模型,探讨α-黑素细胞刺激素(α-MSH)滴眼液对干眼的治疗作用及其可能的机制。方法选36只健康成年雌性Wistar大鼠,随机分为10-5mg/ml α-MSH组(n=10)、10-4mg/mlα-MSH 组(n=10)、10-3mg/mlα-MSH 组(n=10),使用浓度为 3mg/ml的氢溴酸东莨菪碱注射液,0.5ml/次,4次/日(9am、12am、3pm、6pm),腹部皮下左右两侧交替注射制作大鼠干眼模型。同时,每只鼠任选一只眼给予相应浓度的α-MSH滴眼液点眼治疗(50μL/次,2次/日,8am、5pm),另一只眼以同样的方法给予0.9%NaCl溶液点眼作为溶剂对照组,持续28 d。另选6只作为正常对照组,饲养于相同的环境中,并不给予任何处理。治疗前(0d)和治疗后7d、14d、21d、28d分别对各组大鼠行泪膜破裂时间(BUT)、泪液分泌(Schirmer I test,SIt)测量、角膜上皮荧光素钠染色(fluorescein staining,FL)及评分和泪液蕨类实验(TFT)分析。第28d治疗结束时,颈椎脱臼法处死大鼠,取整个眼球,石蜡切片后行HE及过碘酸-雪夫(PAS)染色,并取大鼠新鲜角膜行Reverse Transcription PCR(RT-PCR)检测角膜组织中炎性因子白细胞介素1β(IL-1 β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA的表达水平。结果1.泪膜破裂时间自第7d开始,方差分析示五组间的泪膜破裂时间差异均有统计学意义。其中第7d时,10-4mg/ml α-MSH治疗组的泪膜破裂时间(10.50 ±1.60 s)已较0.9%NaCl溶液处理组(9.13±0.83 s)明显延长,差异有统计学意义(P=0.021)。用药第14d,除了 0.9%NaCl溶液处理组与10-5mg/ml α-MSH治疗组之间差异无统计学意义(P=0.146)外,其余各组两两比较差异均有统计学意义。用药第21d,三组不同浓度的α-MSH治疗组分别与正常对照组和0.9%NaCl处理组相比较差异均有统计学意义。用药第28d,除了 10-5mg/ml α-MSH治疗组与0.9%NaCl处理组差异无统计学意义(P=0.239)、10-4mg/mlα-MSH组与10-3mg/mlα-MSH组差异无统计学意义(P=0.553)外,其余两两比较差异均有统计学意义。2.泪液分泌量的变化方差分析示治疗后各个时间点五组的泪液分泌量差异均有统计学意义。用药第14d时,10-4mg/mlα-MSH治疗组的泪液分泌量明显增多,为(4.88 ±0.74 mm),与正常对照组(6.00±0.65mm)相比较差异无统计学意义(P=0.355);10-4mg/ml α-MSH 组(4.88±0.74mm)、10-3mg/ml α-MSH 组(4.25±0.85mm)均较0.9%NaCl处理组(3.19±1.03mm)明显增多,差异均有统计学意义(P=0.023,P=0.046)。用药第21d,除正常对照组与其它四组处理组两两比较差异均有统计学意义(均为P=0.000)外,余均无统计学意义。用药第28d,除10-5mg/ml α-MSH组与0.9%NaCl组差异无统计学意义(P=0.142)外,其余均有统计学意义。3.角膜荧光素钠染色0.9%NaCl溶液处理组大鼠角膜可见明显的荧光素钠着色,呈密集点状,偶见角膜上皮小片状着染。给予α-MSH滴眼液点眼治疗组大鼠的角膜荧光素钠着色较0.9%NaCl治疗组明显减轻,且随α-MSH滴眼液浓度增高效果更明显,基本接近正常对照组。4.泪液蕨类实验自第7d起,0.9%NaCl溶液处理组大鼠泪液结晶中的蕨类样物逐渐减少,蕨类样物之间的连接中断、分支减少。而同一时间点,α-MSH滴眼液治疗组的蕨类样物形态保持良好。5.角膜HE染色0.9%NaCl溶液处理组大鼠角膜上皮细胞出现增生,较正常组明显增厚,细胞层数增加至10-12层,基底细胞层水肿、排列紊乱,角膜表面欠光滑。而给予α-MSH滴眼液点眼治疗组的大鼠角膜HE染色较0.9%NaCl溶液处理组明显好转,基本接近正常。6.结膜PAS染色观察可见0.9%NaCl溶液处理组大鼠的结膜杯状细胞形态不一致,数量减少。而α-MSH滴眼液点眼治疗组大鼠的结膜杯状细胞数量明显增加,且大致呈剂量依赖性。7.RT-PCR结果显示α-MSH可以下调大鼠角膜中炎性因子IL-1β mRNA、TNF-αmRNA的表达。结论局部应用α-黑素细胞刺激素能够促进大鼠泪液分泌,延长泪膜破裂时间,稳定泪膜,促进角膜上皮损伤修复及杯状细胞增生,减轻眼表炎症反应,有利于缓解干眼造成的病理改变,其中以浓度为10-4mg/ml的α-MSH滴眼液疗效最佳。本实验为临床治疗干眼提供了新的思路及药物选择。
【学位授予单位】:天津医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:R777.34

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