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《天津医科大学》 2015年
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柠檬精油等提取物对变形链球菌luxS基因的影响

陈思佳  
【摘要】:目的:龋病的发生发展必须依靠牙菌斑生物膜才能介导和完成,而变形链球菌(Streptococcus mutans,S.mutans)是牙菌斑生物膜中的主要致龋菌。密度感应系统(quorum sensing,QS)是不同种属细菌之间的通讯系统,参与调节细菌生物膜的形成、糖代谢、耐酸能力以及多种毒力因子的分泌。S.mutans的lux S基因编码的Lux S蛋白是合成其QS系统信号分子的关键酶。柠檬精油(lemon essential oil,LEO)和橙皮苷(hesperidin,HPN)是由柠檬中提取出的天然产物,柠檬烯(limonene,LIM)是LEO的主要成分。茶多酚(tea polyphenol,TP)是茶叶中多酚类物质的总称,是目前具有代表性的植物防龋药物。本实验采用经典的液体稀释法测量LEO、LIM、HPN及TP作用于S.mutans后,其耐酸性、生物膜形成能力以及lux S基因表达水平的变化,探讨LEO等对S.mutans黏附机制及毒力因子表达的影响,为研究天然提取物应用于龋病生态防治提供依据。方法1.测定LEO、LIM、HPN及TP对S.mutans耐酸性的影响测定四种药物对S.mutans的最小抑菌浓度(Minimal Inhibitory Concentration,MIC),将MIC浓度的四种药物对倍稀释于TPY液体培养基中,每组三个浓度。以不添加药物的PH=7-3.5的空白培养基作为对照组。将菌悬液与各组培养液按1:10(v/v)比例接种,培养48h,测定OD值。2.测定LEO、LIM、HPN及TP对S.mutans生物膜形成能力的影响将MIC浓度的四种药物对倍稀释于TPY液体培养基中,每组四个浓度。以不添加药物的空白培养基作为对照组。将菌悬液与各组培养液按1:1(v/v)的比例混合接种于96孔板中,培养48h后取出,测定OD值。3.测定LEO、LIM、HPN及TP对S.mutans的lux S基因转录水平表达的影响实验分组方法同实验2。将OD为1.0的菌悬液以1∶10(v/v)比例接种于各组,37℃培养18h,提取细菌总RNA,逆转录成c DNA,采用实时荧光定量PCR方法测定四组不同药物处理后S.mutans的lux S基因的表达量。结果1.不同浓度的LEO、LIM、HPN及TP对S.mutans耐酸能力的影响S.mutans在PH=7-3.5的系列TPY培养基中生长,其生长量不同,在PH=6.5时生长达到峰值;由PH=6-3.5,随着PH的降低,生长量下降(F=228.506,P0.01);同一PH条件下实验组与对照组相比,细菌生长量降低。在0.562mg/ml至2.250mg/ml内,随着LEO浓度的增加,细菌生长量下降(F=498.266,P0.01)。在2.62 mg/ml至10.5mg/ml内,随着LIM浓度的增加,细菌生长量下降(F=320.600,P0.01)。在1.0mg/ml至4.0mg/ml内,随着HPN浓度的增加,细菌生长量下降(F=327.273,P0.01)。在0.5mg/ml至2.0mg/ml内,随着TP浓度的增加,细菌生长量下降(F=449.599,P0.01)。在1/2MIC浓度条件下,四种药物之间两两比较,对S.mutans耐酸性的影响LEO、TPLIMHPN(F=524.164,P0.01)。LEO组与TP组之间差异无统计学意义(P0.05)。2.不同浓度的LEO、LIM、HPN及TP对S.mutans生物膜形成能力的影响。在1/2MIC至1/16MIC的浓度范围内,随着药物浓度的增加,四种药物对S.mutans生物膜形成的抑制率均呈上升趋势。比较1/2MIC浓度下四种药物对S.mutans生物膜形成的抑制率,LEOTPLIMHPN,差异有统计学意义(F=25.777,P0.01)。3.不同浓度的LEO、LIM、HPN及TP对S.mutans的lux S基因表达的影响从0.562mg/ml到2.25mg/ml的浓度范围内,随着LEO浓度的逐渐升高,lux S基因的m RNA表达水平从0.7511到0.1218呈下降趋势(F=313.600,P0.01)。从2.62mg/ml到10.5mg/ml的浓度范围内,随着LIM浓度的逐渐升高,lux S基因的m RNA表达水平从0.8134到0.1288呈下降趋势(F=120.181,P0.01)。从1.0mg/ml到4.0mg/ml的浓度范围内,随着HPN浓度的逐渐升高,lux S基因的m RNA表达水平从0.8697到0.1632呈下降趋势(F=196.335,P0.01)。从0.5mg/ml到2.0mg/ml的浓度范围内,随着TP浓度的逐渐升高,lux S基因的m RNA表达水平从0.7440到0.1109呈下降趋势(F=243.448,P0.01)。结论1.S.mutans的适宜生长PH值为6.5。在低于MIC浓度范围内,LEO、LIM、HPN及TP均能降低S.mutans的耐酸性,作用强度LEO、TPLIMHPN。2.LEO、LIM、HPN及TP在低于MIC浓度范围内,均能抑制牙菌斑生物膜的形成。作用强度LEOTPLIMHPN。3.对lux S基因表达的抑制作用LEO、TPLIM、HPN。不同浓度条件下,LEO和LIM对S.mutans的lux S转录表达之间的差异有统计学意义。说明LIM是LEO抑制lux S转录表达的成分之一,但并不起主要作用,LEO中仍有其他成分在抑制lux S表达中发挥作用,或与LIM发挥协同作用。4.LEO、LIM、HPN及TP均可参与S.mutans密度感应系统的调节,从而影响生物膜的形成和毒力因子的产生,并降低细菌耐酸性。LEO与TP相比具有较强的优势,有望开发出具有防龋作用的新型植物药物。
【学位授予单位】:天津医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R285

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【参考文献】
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1 姜葳;梁景平;;变异链球菌压力耐受机制的研究进展[J];国际口腔医学杂志;2011年01期
2 夏丽;储冰峰;;变形链球菌LuxS蛋白与LuxS/AI-2群体感应系统的研究进展[J];中华老年口腔医学杂志;2011年05期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 童忠春;倪龙兴;马丽芳;周琳;侯波;赵秀;;变异链球菌luxS基因对牙菌斑生物膜形成的影响研究[J];华西口腔医学杂志;2009年04期
2 张鹰;文玲英;储冰峰;;变形链球菌黏附相关分子及其针对性免疫防龋的研究进展[J];中华老年口腔医学杂志;2010年02期
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2 李一帆;杨晨;杭天依;李光武;;柠檬精油对DXM肥胖鼠体重的影响及机制[A];中国解剖学会2013年年会论文文摘汇编[C];2013年
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