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《天津医科大学》 2019年
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5-ALA介导的光动力治疗对人口腔鳞状细胞癌的体内外作用研究

朱梦琪  
【摘要】:目的本研究旨在通过体外细胞实验和体内动物实验来探讨5-氨基酮戊酸(5-aminolevulinic acid,5-ALA)介导的光动力治疗(photodynamic therapy,PDT)对人口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞的杀伤作用并初步探讨其作用机制,为临床OSCC的治疗提供参考。方法1.体外培养人舌鳞状细胞癌细胞SCC-25。2.流式细胞术检测不同作用时间及不同浓度的5-ALA在SCC-25细胞中转化为原卟啉IX(protoporphyrin IX,PpIX)的情况。3.用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyltetrazolium,MTT)比色法检测单独5-ALA孵育、单独激光照射和5-ALA结合激光照射对SCC-25细胞生长的抑制作用。4.用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(annexin V-fluorescein isothiocyanate/propidiumiodide,Annexin V-FITC/PI)双染色法检测5-ALA结合激光照射对SCC-25细胞凋亡的诱导效应。5.用2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光探针法检测5-ALA结合激光照射对SCC-25细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成水平的影响。6.构建SCC-25细胞移植瘤裸鼠模型,成瘤后将小鼠分为对照组(只注射生理盐水)、单独5-ALA给药组及5-ALA结合激光照射组,考察肿瘤局部注射5-ALA后行肿瘤局部激光照射对小鼠体内肿瘤生长的抑制作用。结果1.SCC-25细胞内PpIX的生成水平与5-ALA浓度(0~150μg/mL)及培养时间(0~24 h)呈正相关;当5-ALA浓度增至100μg/mL后,胞内PpIX生成水平趋于相对恒定。2.在SCC-25细胞中,与不用5-ALA培养的对照组相比,5-ALA(浓度分别为5、10、25、50、100μg/mL)孵育12 h后结合激光照射治疗表现出显著的细胞生长抑制作用(P﹤0.05)。3.在SCC-25细胞中,与不用5-ALA培养的对照组相比,5-ALA(浓度分别为5、10、25、50、100μg/mL)孵育12 h后结合激光照射治疗表现出显著的细胞凋亡诱导效应(P﹤0.05)。4.与对照组(不加5-ALA、不进行激光照射)相比,单独激光照射和单独5-ALA给药(浓度100μg/mL)并未显著触发细胞内活性氧的产生(P﹥0.05),5-ALA(浓度分别为5、10、25、50、100μg/mL)结合激光照射后,SCC-25细胞中活性氧大量生成(P﹤0.05),其生成水平与胞内PpIX含量呈正相关。5.在荷瘤小鼠体内,5-ALA(给药剂量分别为10、25和50 mg/kg)结合激光照射治疗高效抑制了SCC-25肿瘤的生长,各5-ALA结合激光治疗组的小鼠肿瘤体积均显著小于对照组(P﹤0.05)。结论5-ALA介导的光动力治疗可以有效诱导SCC-25细胞内PpIX的生成,经特定波长的激光照射后可触发SCC-25细胞中ROS的大量生成,产生显著的细胞毒性与细胞凋亡诱导作用,进而有效抑制肿瘤的体内外生长。
【学位授予单位】:天津医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R739.8

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