丹参单体对动脉粥样硬化过程中血管内皮细胞NF-κB及相关因子影响的实验研究

【摘要】：目的： 利用培养人脐静脉内皮细胞株-ECV304，建立肿瘤坏死因子(TNF-α)诱 导的细胞损伤模型，探讨丹参的主要水溶性和脂溶性单体成分-丹酚酸B和丹参 酮ⅡA对动脉粥样硬化发病过程中血管内皮细胞核因子NF-κB及其相关因子表达 的影响，阐明丹酚酸B和丹参酮ⅡA抗动脉粥样硬化作用的分子基础及作用靶点。 方法： 通过建立TNF-α诱导的细胞损伤模型，运用免疫细胞化学、酶联免疫吸附实 验、反转录聚合酶链式反应和放射免疫等现代实验方法，检测不同浓度丹酚酸B 或丹参酮ⅡA处理培养细胞的核因子NF-κB、IκB-α及其相关因子ICAM-1、 VCAM-1的表达和细胞培养液中NO、ET、TXB2、 6-Keto-PGF1。的含量。 结果： 1． 当TNF-α浓度为10ng/ml时可明显造成ECV304细胞的损伤，表现为 NF-κB的激活及粘附分子表达升高，同时使内皮细胞分泌血管舒缩因子失调。 PDTC可抑制这种损伤。丹酚酸B和丹参酮ⅡA均可不同程度抑制TNF-α所造成 的细胞损伤。 2． 细胞ELISA和免疫细胞化学检测结果显示：TNF-α可诱导ECV304细胞 核因子NF-κB的表达升高，使其抑制因子IκB-α的表达明显降低，PDTC可抑制 这种作用。丹酚酸B和丹参酮ⅡA均可降低NF-κB的表达，同时升高IκB-α的 表达，而丹参酮ⅡA的作用具有剂量依赖性。 3． 放射免疫方法和化学方法结果显示：TNF-α明显减少ECV304细胞培养 液中血管舒张因子NO和PGI2的含量，增加收缩因子ET-1和TXA2的含量。PDTC 可明显增加血管舒张因子NO和PGI2的含量，减少收缩因子ET-1和TXA2的含 量。丹酚酸B可明显增加血管舒张因子NO和PGI2的含量，减少收缩因子ET-1 和TXA2的含量。丹参酮ⅡA可明显增加血管舒张因子NO的含量，减少收缩因 子ET-1和TXA2的含量，但对PGI2的含量无明显影响。 4． RT-PCR结果显示：TNF-α可使ECV304细胞ICAM-1的表达较正常细胞 升高4． 8倍，并可诱导VCAM-1的表达。两个浓度的PDTC、丹酚酸B、丹参酮 ⅡA均可降低粘附分子ICAM-1m RNA的表达，分别比模型组降低了1． 4和4、 2． 5 和3． 2、 1和1． 5倍；两个剂量的PDTC、丹酚酸B、丹参酮ⅡA均可降低粘附分 子VCAM-1 m RNA的表达，分别比模型组降低了3． 2和4． 5、 3、 1和2倍。 中文摘要 结论: 1.TNF一a可使ECV3O4细胞NF一沼的激活及粘附分子表达升高，同时使内皮 细胞分泌的血管活性物质分泌失调，从而造成内皮细胞的损伤及内皮细胞功 能障碍，加重动脉粥样硬化的发生发展，。 2.抗氧化剂PDTC可抑制TNF一。诱导的ECv304细胞的NF一沼的激活及粘附 分子表达升高等损伤，具有抗动脉粥样硬化作用。 3.月一酚酸B可通过抑制TNF一Q诱导的ECV304细胞NF一沼的激活、粘附分子 的表达及血管活性物质失调，而发挥抗动脉粥样硬化作用。 4.月一参酮IIA可不同程度的抑制NF一KB的激活和粘附分子的表达及调节血管活 性物质失调，并具有一定的剂量依赖性，在抗动脉粥样硬化中发挥重要作用。