收藏本站
《天津商业大学》 2007年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

黄曲霉毒素B_1快速检测试剂盒的研制

林柏玲  
【摘要】: 黄曲霉毒素B1具有很强的毒性,1988年被国际癌症机构列为A类致癌物质。黄曲霉毒素会降低动物的产奶产蛋量,危害人类的健康,对经济也造成一定的影响。为了对黄曲霉毒素进行有效监控,必须有灵敏、特异、快速、可靠、容易普及的方法进行检测。本项研究应用杂交瘤技术制备抗黄曲霉毒素B1的单克隆抗体,为建立ELISA方法检测AFTB1奠定基础。 本研究改进江湖等人报道的EDC法制备了检测抗原AFTB1-OVA。接下来实施免疫方案,初次免疫为AFTB1-BSA结合完全弗氏佐剂,足垫免疫,间隔四周后结合不完全弗氏佐剂加强免疫小鼠,最后一次免疫后三周通过尾静脉或腹腔冲击免疫小鼠,三到四天后取脾进行细胞融合。 在免疫方案实施的同时,确立检测方法,以棋盘滴定试验确定抗原1:100包被,免疫鼠血清1:5000稀释作为阳性对照(PC),正常鼠血清1:100稀释作为阴性对照(NC),辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG1:400稀释。 利用杂交瘤技术将免疫Babl/c小鼠得到的脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,间接ELISA方法筛选阳性细胞株。经过八次融合,多次筛选,都得不到稳定的阳性细胞株,故而进行了多克隆抗体的制备。 通过免疫家兔,获得阳性血清,以正辛酸-硫酸铵沉淀方法纯化血清,用免疫印迹实验证明了该血清是抗黄曲霉毒素B1的多抗,间接ELISA法测得纯化后的多抗效价为2.56×105,间接性竞争法测得该抗体对黄曲霉毒素B1的最低检出浓度为0.05μg/ml。
【学位授予单位】:天津商业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:Q819

免费申请
【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 何娜;基于HTS-ELISA的抗黄曲霉毒素M_1单克隆抗体制备新方法研究[D];黑龙江八一农垦大学;2011年
2 张彩霞;雪卡毒素单克隆抗体的制备及鉴定[D];广东工业大学;2011年
3 朱思思;EV71型肠道病毒抗体的制备与鉴定[D];广东工业大学;2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘作新,高军侠;黄曲霉毒素的检测方法研究进展(综述)[J];安徽农业大学学报;2004年02期
2 刘大岭,姚冬生;黄曲霉毒素及其去毒转化研究新进展[J];国外医学(卫生学分册);1998年01期
3 周艺林;饲料中黄曲霉毒素对畜禽的危害及控制方法[J];贵州畜牧兽医;2004年02期
4 王光建,牟家琬,王道若,鲁长豪,叶梅君;黄曲霉毒素B_1单克隆抗体的制备和鉴定[J];华西医科大学学报;1995年03期
5 陈福生,罗信昌,周启,李根久;黄曲霉毒素B_1的免疫检测Ⅰ.抗原的制备[J];菌物系统;1999年03期
6 陈福生,罗信昌,周启,李根久;黄曲霉毒素B_1的免疫检测 Ⅱ.抗体的产生及应用[J];菌物系统;1999年04期
7 陈兰明,陈永萱;黄曲霉毒素B_1间接竞争抑制ELISA定量分析法的建立和应用[J];南京农业大学学报;1998年02期
8 陈兰明,陈永萱;黄曲霉毒素B_1直接竞争抑制ELISA快速筛选法的建立[J];南京农业大学学报;1998年04期
9 李雪鸥;浅谈黄曲霉毒素[J];山西食品工业;1996年03期
10 李榆梅;真菌的有毒次级代谢产物—黄曲霉毒素[J];山西食品工业;1997年02期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 段鸿斌;;金黄色葡萄球菌B型肠毒素的酶联免疫检测[J];安徽农业科学;2008年07期
2 王娜;潘治利;杨君丽;艾志录;;花生中黄曲霉毒素检测方法的研究[J];安徽农业科学;2008年24期
3 巫小琴;徐强;李燚;陶诗;黎勇;;纤维素酶产生菌的分离及其酶活力测定[J];安徽农业科学;2009年35期
4 刘罗发;黄德娟;黄德超;许剑平;耿道行;杨新冬;;食品中黄曲霉毒素及理化脱毒措施研究进展[J];安徽农业科学;2011年08期
5 安虹;邹广迅;;黄曲霉素毒性效应机制的研究进展[J];安徽农业科学;2011年24期
6 刘作新,高军侠;黄曲霉毒素的检测方法研究进展(综述)[J];安徽农业大学学报;2004年02期
7 张志美;沈志强;;黄曲霉毒素对家禽的影响及预防措施[J];家禽科学;2009年12期
8 葛琳;;黄曲霉毒素检测方法[J];科技创新与应用;2012年01期
9 陈燕,翟俊民,王治伦,谭希旺,薜莉,耿冬;补硒、补维生素C和粮食干燥治疗大骨节病效果的对比研究[J];中国地方病防治杂志;2003年06期
10 罗超;李逢慧;程天印;;黄曲霉毒素检测方法研究概况[J];动物医学进展;2008年S1期
中国重要会议论文全文数据库 前9条
1 张崟;曾庆孝;朱志伟;韩光赫;;黄曲霉毒素的快速检测方法[A];“科技创新与食品产业可持续发展”学术研讨会暨2008年广东省食品学会年会论文集[C];2008年
2 李成成;杨维仁;;饲料中霉菌毒素的危害及其防治方法研究进展[A];2010山东饲料科学技术交流大会论文集[C];2010年
3 曹红;尹逊慧;陈善林;胡亚冬;胡熔;李世川;谢春芳;苏全;姚冬生;;不同剂量的饲用黄曲霉毒素解毒酶制剂对岭南黄肉鸡日粮中黄曲霉毒素B1解毒效果的研究[A];饲料酶制剂的研究与应用[C];2009年
4 张桂山;娄玉杰;;霉败饲料对鹌鹑健康及血液指标的影响[A];第九届全国家畜环境科学讨论会论文集[C];2004年
5 张志祥;程东美;徐汉虹;;生物农药的发展优势及存在问题[A];第三届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第二届全国生物农药研讨会论文集[C];2004年
6 张加力;刘义波;;抗猪囊尾蚴头节单克隆抗体的制备[A];吉林省畜牧兽医学会2007学术年会论文集[C];2007年
7 张媛;赵黎黎;;双抗体夹心ELISA检测猪囊尾蚴头节蛋白含量方法的建立[A];吉林省畜牧兽医学会2007学术年会论文集[C];2007年
8 杨美华;陈建民;张雪辉;;中药材中黄曲霉毒素的含量测定[A];药用植物研究与中药现代化——第四届全国药用植物学与植物药学术研讨会论文集[C];2004年
9 吴双明;张海华;;乳品中黄曲霉毒素检测的研究[A];第三届中国奶业大会论文集(下册)[C];2012年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 管笛;黄曲霉毒素M_1单克隆抗体及检测技术研究[D];中国农业科学院;2011年
2 樊彦红;黄曲霉毒素B_1和脱氧雪腐镰刀菌烯醇对锦鲤及原代培养肝细胞的毒性研究[D];南京农业大学;2008年
3 郑海平;银杏叶提取物对AFB1致大鼠肝癌抑制作用的研究[D];广西医科大学;2012年
4 孙秀兰;食品中黄曲霉毒素B_1金标免疫层析检测方法研究[D];江南大学;2005年
5 史莹华;纳米级硅酸盐结构微粒(NSP)吸附猪饲粮中黄曲霉毒素的研究[D];浙江大学;2005年
6 胡娜;基因芯片技术在黄曲霉毒素生物合成相关基因检测中的应用研究[D];南昌大学;2006年
7 张雪辉;中药中黄曲霉毒素检测方法研究及模式识别在中药领域中的应用[D];中国协和医科大学;2004年
8 黄飚;赭曲霉毒素A和黄曲霉毒素B_1的超微量免疫分析[D];江南大学;2006年
9 卢永红;饲料霉菌毒素脱毒剂的应用技术研究[D];南京农业大学;2006年
10 马良;黄曲霉毒素B_1高灵敏度检测技术研究[D];中国农业科学院;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 邢春芳;豆粕中胰蛋白酶抑制剂的分离纯化及其间接竞争酶联免疫吸附检测方法的研究[D];华中农业大学;2010年
2 徐娟;T-2毒素多克隆抗体的制备及其化学发光免疫检测的初步研究[D];华中农业大学;2010年
3 郭艳萍;抑黄曲霉乳酸菌的筛选及菌种鉴定[D];安徽农业大学;2010年
4 盛强;新型高效储粮防霉剂的研究[D];河南工业大学;2010年
5 耿旭;利用气体传感器监测储粮霉菌活动的研究[D];河南工业大学;2010年
6 王如德;山东省东平县食管癌高发影响因素的病例对照研究[D];泰山医学院;2007年
7 刘蓉;抗黄曲霉毒素B_1荧光重组抗体的制备[D];江南大学;2010年
8 刘畅;DY5000快速检测农产品中有毒有害物质方法验证[D];湖南农业大学;2010年
9 李铁钢;黄连、白芷中有害物质研究及黄连中生物碱抗Ⅱ型糖尿病机理探究[D];成都中医药大学;2010年
10 杨静静;利用变质玉米联产燃料乙醇和重金属吸附剂的研究[D];山东建筑大学;2011年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 崔爱利,许文波,李秀珠,胡家瑜,凌华,唐伟,杨智宏,张燕,陈立,Hiroyuki Shimizu;肠道病毒71型的RT-PCR诊断及基因特征[J];病毒学报;2004年02期
2 黄飚,肖华龙,朱利国,谭成,蔡刚明,金坚;CA19-9时间分辨荧光免疫分析方法的建立及应用[J];标记免疫分析与临床;2001年01期
3 谭玉华,张新利;TR-FIA对低浓度HBV标志物检出的临床价值[J];标记免疫分析与临床;2004年03期
4 杨焱,宓晓黎,成恒嵩,赵晓联,袁建兴;薄层扫描法测定饲料中黄曲霉毒素B_1的含量[J];饲料工业;1996年10期
5 刘红河;刘桂华;杨俊;陈裕华;朱舟;;高效液相色谱-电喷雾串联质谱法测定鱼体中雪卡毒素[J];分析化学;2009年11期
6 林月霞;董斌;袁茵;段涛;田素娟;;抗氯霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株的制备及筛选[J];广东药学院学报;2009年05期
7 李佐卿,谢东华,孙大为,康继韬,俞雪钧;免疫亲和柱HPLC荧光检测酒中黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2[J];光谱实验室;2001年01期
8 崔银珠;单克隆抗体的临床应用[J];国外医药(合成药 生化药 制剂分册);2001年01期
9 刘大岭,姚冬生;黄曲霉毒素及其去毒转化研究新进展[J];国外医学(卫生学分册);1998年01期
10 梁乾德,王升启;药物高通量筛选分析技术[J];国外医学.药学分册;2002年01期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 彭艳;肝癌转移相关蛋白及其兔单克隆抗体的筛选和鉴定[D];第二军医大学;2004年
2 郭小清;抗TNF McAb的研制及初步应用[D];中国协和医科大学;1995年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张彩霞;雪卡毒素单克隆抗体的制备及鉴定[D];广东工业大学;2011年
2 赵玉龙;牛病毒性腹泻病毒(BVDV)卵黄抗体制备及其对病毒中和活性研究[D];石河子大学;2009年
3 汪永和;杂交瘤细胞克隆化培养及其分泌的单克隆抗体的纯化[D];昆明医学院;2004年
4 张银志;ELISA检测食品中黄曲霉毒素B_1的方法学研究及应用[D];西北农林科技大学;2003年
5 江湖;黄曲霉毒素B_1间接竞争ELISA检测方法的建立与单克隆抗体免疫亲和柱的初步研制[D];南昌大学;2005年
6 杨扬;青霉素类药物残留ELISA检测方法研究[D];浙江大学;2006年
7 刘然;黄曲霉毒素M_1检测试剂盒的制备及其原料乳含量预警机制[D];天津商学院;2006年
8 郭金花;食品中残留醋酸甲羟孕酮酶免疫检测方法研究[D];江南大学;2006年
9 魏瑞成;莫能菌素多克隆抗体制备及应用[D];南京农业大学;2006年
10 吴扬;草丁膦单克隆抗体的制备[D];华中师范大学;2007年
【二级引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 朱思思;EV71型肠道病毒抗体的制备与鉴定[D];广东工业大学;2012年
2 李月明;双酚A单克隆抗体制备及胶体金免疫层析试纸条的研制[D];广东工业大学;2012年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈达民;;微柱法快速测定饲料中黄曲霉毒素的总量[J];饲料工业;1993年01期
2 杨焱,宓晓黎,成恒嵩,赵晓联,袁建兴;薄层扫描法测定饲料中黄曲霉毒素B_1的含量[J];饲料工业;1996年10期
3 刘大岭,姚冬生,陈敏峰;真菌提取液对黄曲霉毒素解毒作用的研究[J];广东药学院学报;1995年02期
4 李佐卿,谢东华,孙大为,康继韬,俞雪钧;免疫亲和柱HPLC荧光检测酒中黄曲霉毒素B_1、B_2、G_1、G_2[J];光谱实验室;2001年01期
5 聂孝同;卢大云;;饲料黄曲霉毒素的检测方法[J];贵州畜牧兽医;1993年01期
6 S·D·Holladay,phD;秦云;;间接酶联免疫吸附试验检测黄曲霉毒素抗体的评价[J];贵州畜牧兽医;1993年01期
7 李卫岗,鲁长豪,肖志芳,王光建;黄曲霉毒素B_1人工抗原及抗体的制备研究[J];华西医科大学学报;1992年03期
8 陈福生,罗信昌,周启,李根久;黄曲霉毒素B_1的免疫检测Ⅰ.抗原的制备[J];菌物系统;1999年03期
9 陈兰明,陈永萱;黄曲霉毒素B_1间接竞争抑制ELISA定量分析法的建立和应用[J];南京农业大学学报;1998年02期
10 韩红岩,汪军;玉米中黄曲霉毒素提取方法的评价[J];山东农业大学学报;1999年03期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张小兵;邸禄芹;吴萌;闫静辉;;单克隆抗体与多克隆抗体配对ELISA方法比较[J];生物技术通报;2009年11期
2 周明华,任峰,赵丽萍,邱鹏新;RGNTF单抗与多抗的特性和抑制作用(简报)[J];实验生物学报;1991年03期
3 刘功良;王菊芳;李志勇;梁世中;;重金属离子的免疫检测研究进展[J];生物工程学报;2006年06期
4 张小兵;吴萌;齐颖颖;邸禄芹;李君华;李春生;成凯琳;闫静辉;;金玉兰酶制剂(β-内酰胺酶)抗体制备及初步应用[J];生物技术通报;2010年01期
5 于师宇;王蓓蕾;谢光洪;李小兵;宋文学;周晓翠;张志刚;孔涛;张焱;肖成蕊;牟俊;于光;王哲;;黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备与鉴定[J];安徽农业科学;2008年13期
6 孙雷心;;美国的单克隆抗体和多克隆抗体实业[J];生物技术通报;1990年04期
7 杨磊;张春明;郝建秀;佘义;王德芝;;人心肌肌钙蛋白Ⅰ单克隆抗体及多克隆抗体的制备[J];生物技术通讯;2010年04期
8 吴挹芳,蔡燕刚,马蓂,谢正旸;间接血凝检测霍乱弧菌多克隆抗体及单克隆抗体的应用[J];第二军医大学学报;1986年02期
9 ;细胞工程[J];生物技术通报;1989年05期
10 许继宗;;生物导弹[J];自然杂志;1988年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 孟宪荣;周蕾蕾;栗绍文;周祖涛;毕丁仁;陈辉;齐冰玉;;猪骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ基因的表达及其单克隆抗体的制备[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(上册)[C];2009年
2 刘健宏;王标;庄向生;王长兵;周伦江;刘玉涛;;单克隆抗体与免疫荧光染色技术[A];福建省科协首届学术年会卫星会议——畜牧业持续发展对策学术研讨会论文集[C];2001年
3 李丹丹;张小莺;;猪戊型肝炎病毒重组蛋白ORF2-V1单克隆抗体的制备及抗原表位差异分析[A];全国第十一届生化与分子药理学学术会议论文集[C];2009年
4 蒯应松;温佩忠;杨元立;王香菊;;单克隆抗体在法医学应用进展[A];首届中国法医物证学术交流会论文汇编[C];1993年
5 王香菊;徐秀兰;严红;蒯应松;陈艳;;抗人血红蛋白(Hb)单克隆抗体制备及其特性鉴定[A];第二次全国法医物证学学术交流会论文集[C];1998年
6 周常文;马纪萱;高远;迈迪娜;吕兆启;;抗雄烯二酮独特型抗体的制备及其性质[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
7 高富红;戴小华;沈红;吴国娟;;雌二醇人工抗原的合成及多克隆抗体的制备[A];中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第九次学术讨论会论文与摘要集[C];2006年
8 祭芳;李华;徐剑宏;史建荣;;抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇的抗体制备及其检测方法的建立[A];江苏省植物病理学会第十一次会员代表大会暨学术研讨会论文集[C];2008年
9 江子卿;朱亚;彭素芬;徐永华;季永镛;;抗C-反应性蛋白单克隆抗体的研制[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
10 徐爽;徐焱;;单克隆抗体在输血领域的应用探讨[A];中国输血1999年年会暨纪念ABO血型发现100周年学术交流论文专辑[C];1999年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 贾超时李德成;单克隆抗体产业研发项目将落户大庆[N];大庆日报;2008年
2 小许;市领导会见美国生物医药巨头[N];无锡日报;2010年
3 姜海;英科学家发现单克隆抗体[N];科技日报;2007年
4 本报特约撰稿人 李朝;单抗:生物医药发展的主旋律[N];医药经济报;2006年
5 记者 项铮;赛诺菲巴斯德研制抗狂犬病单克隆抗体[N];科技日报;2008年
6 记者 杨俊坚;单抗药物:站在同一起跑线[N];医药经济报;2011年
7 张蕾;治疗用单克隆抗体[N];光明日报;2002年
8 李晓;“苏州系列”单克隆抗体走向世界[N];苏州日报;2008年
9 张骁束;梅英;单克隆抗体的研究进展[N];中国医药报;2003年
10 邹平;单克隆抗体研究取得突破[N];医药经济报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王春梅;有机磷高特异性和宽谱单克隆抗体的筛选与比较研究[D];浙江大学;2010年
2 唐琳;肝再生增强因子与肝癌发生、发展关系的研究[D];重庆医科大学;2005年
3 侯桂华;巨噬细胞移动抑制因子在同种移植排斥中作用及其机理的研究[D];山东大学;2004年
4 高勇;新型单克隆抗体荧光探针染料的合成及免疫荧光组织化学应用[D];西北大学;2006年
5 江敏;大鼠单克隆抗体的制备、鉴定、基因克隆、抗原分析以及药物偶联物的抗肿瘤作用研究[D];中国协和医科大学;1996年
6 秦迎松;人促血液血管细胞生成素(Haemangiopoietin, HAPO)单克隆抗体的制备、鉴定及应用[D];中国协和医科大学;2004年
7 万忠海;抗PEA单抗和单链抗体制备及在绿脓感染中的应用[D];吉林大学;2008年
8 吕大伟;抗RANKL单克隆抗体在大鼠类风湿性关节炎模型中的应用及RANKL转录调控的探索性研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
9 庄国洪;抗DR4、DR5单克隆抗体诱导胶质瘤细胞株凋亡的研究[D];吉林大学;2004年
10 付建芳;溶藻弧菌抗独特型抗体基因工程疫苗的研究[D];第四军医大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 林柏玲;黄曲霉毒素B_1快速检测试剂盒的研制[D];天津商业大学;2007年
2 夏青娟;猪生长激素单克隆抗体的制备及应用[D];吉林农业大学;2006年
3 宋海龙;猪生长激素ELISA检测体系的建立和应用[D];吉林农业大学;2008年
4 尹锴;烟曲霉单克隆抗体的制备与鉴定以及烟曲霉GM抗原捕获方法的建立[D];第一军医大学;2005年
5 王晓杜;猪干扰素α、β、γ基因克隆、原核表达及其单克隆抗体制备的研究[D];华中农业大学;2007年
6 孙佳;牛抵抗素单克隆抗体的制备及ELISA检测方法的建立[D];吉林大学;2009年
7 赵伟;久效磷单克隆抗体杂交瘤细胞株建立及性质鉴定[D];华中师范大学;2009年
8 俎晶晶;四环素多克隆抗体的制备及丁胺卡那霉素酶联免疫检测的初步研究[D];郑州大学;2007年
9 韩丽滨;布鲁氏菌多克隆抗体和单克隆抗体的制备与鉴定[D];河北农业大学;2009年
10 许文革;抗磺胺嘧啶抗体制备及磺胺嘧啶酶联免疫分析方法的初步建立[D];中国原子能科学研究院;2007年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026