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《河北大学》 2004年
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灭活原生质体融合选育α-ALDC-高产菌株

周海霞  
【摘要】:α-乙酰乳酸脱羧酶可以去除啤酒中的双乙酰,在啤酒工业中有着广泛的应用前景。双亲灭活原生质体融合技术优点较多,是原生质体融合育种中针对无遗传标记同种不同株双亲的一种常用的有效方式。因此,对本实验室保存的两株产α-乙酰乳酸脱羧酶的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)进行双亲灭活原生质体融合,筛选高酶活菌株。 试验首先确定了比较适合的双亲菌株培养条件。选择使用了完全培养液和发酵培养液两种培养基以及完全液体培养基20mL和40mL装液量。绘制了不同条件下的生长曲线,确定了最佳培养条件是:将菌株由斜面接种到完全固体培养基上,活化培养一天,再将其接种到液体完全培养基,37℃,200rpm,摇床培养14h,最后按5%的接种量接种到20mL的液体完全培养基,继续活化3.5—4h。将培养好的菌体收集起来,进行溶菌酶处理,制备原生质体。本试验选择了多个溶菌酶浓度,在32℃条件下处理双亲菌株。通过绘制形成率和再生率曲线,认为在32℃,用50μg/mL的溶菌酶处理双亲菌株20min,形成率较高,而且又有一定的再生能力,适合融合。将制备的V-20原生质体进行紫外灭活,3226—5原生质体进行热灭活,通过分析灭活后原生质体的融合率确定最佳融合条件是用pH9.0的40%的PEG6000,38℃,作用于混合菌液15min。本试验共得到了900株融合子,将这些融合子传代10次并测酶活。最后筛得3株菌,其酶解后的上清液酶活高于亲株。试验最后通过对融合子与双亲菌株的DNA含量的简单比较,进一步验证了筛得的菌株为融合子。
【学位授予单位】:河北大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:Q933

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【引证文献】
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1 陈若雯;高产胞外多糖乳酸乳杆菌的选育及其发酵条件的优化[D];华中农业大学;2010年
2 严蔚东;应用灭活原生质体融合法选育抗菌脂肽高产菌株[D];南京农业大学;2009年
3 任柏林;耐辐射融合菌株的构建及其对铀的吸附试验研究[D];南华大学;2010年
【参考文献】
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【共引文献】
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8 焦迎春,郑晓冬;姬松茸子实体中活性肽的分离及其组成的初步研究[J];青海师范大学学报(自然科学版);2005年01期
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2 褚西宁;罗建颖;程巧梅;;棒束孢霉碱性磷酸酯酶部分理化性质的研究[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第四卷)[C];1996年
3 唐章生;;巴西鲷乳酸脱氢酶同工酶的初步研究[A];广西水产研究所论文集(2001—2005)[C];2006年
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10 张永祥;华静月;何礼远;滕建勋;;马铃薯叶盘愈伤组织再生苗抗青枯病变异株的筛选[A];“植物病虫害生物学研究进展”——植物病虫害生物学国家重点实验室研究论文选[C];1995年
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1 陈若雯;高产胞外多糖乳酸乳杆菌的选育及其发酵条件的优化[D];华中农业大学;2010年
2 王昀璐;Lux标记毒死蜱降解菌β菌株和土壤中定殖动态研究[D];安徽农业大学;2010年
3 陈卿;α-乙酰乳酸脱羧酶固定化及其应用的研究[D];江南大学;2010年
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9 韩成玲;矿质元素对北虫草继代培养表型多样性,产量及相关酶活性的影响[D];沈阳农业大学;2010年
10 刘莲娜;玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63与变铅青链霉菌TK24的原生质体种间融合[D];河北农业大学;2011年
【同被引文献】
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1 王怡平,荚荣,陈伟元,凌芸,徐怀恕;球形红假单胞菌和荚膜红假单胞菌的原生质体融合[J];青岛海洋大学学报(自然科学版);2000年02期
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10 陆晓峰;楼福乐;毛伟钢;梁国明;李国祯;刘光全;;超滤—反渗透—电渗析组合工艺处理放射性废水[J];水处理技术;1993年01期
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1 彭学兰;孙荣高;;酵母融合子净化豆制品废水的试验研究[A];2007中国环境科学学会学术年会优秀论文集(上卷)[C];2007年
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【二级引证文献】
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1 王晓飞;冠菌素高产菌种选育的初步研究[D];江西农业大学;2011年
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【二级参考文献】
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10 王成涛,牛天贵,岳晓禹,马玉君;应用原生质体融合技术构建高效降解胆固醇的乳酸菌[J];食品与发酵工业;2002年03期
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8 王镨;许英;张信强;;香菇(Lentinus edodes)原生质体再生菌丝的形状发生[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
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1 周海霞;灭活原生质体融合选育α-ALDC-高产菌株[D];河北大学;2004年
2 赵硕;耐高渗(高糖)酵母菌株的选育[D];安徽农业大学;2010年
3 白忠彬;原生质体介导的外源性GRF基因在家兔及小鼠肌肉中的表达[D];延边大学;2002年
4 彭帅;电融合法构建海藻糖高产菌株的研究[D];吉林农业大学;2004年
5 张新峰;嗜热真菌高产木聚糖酶及其酶法制备低聚木糖的研究[D];湖北工业大学;2011年
6 王丽威;原生质体融合构建增香型猕猴桃酒酵母的研究[D];西北农林科技大学;2004年
7 王春丽;β-葡萄糖苷酶高产菌株的选育及玉米芯的诱导作用研究[D];北京化工大学;2010年
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10 张宇昊;康氏木霉的原生质体诱变及玉米秸秆发酵酒精工艺研究[D];河北农业大学;2004年
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