收藏本站
《河北大学》 2004年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

蚯蚓纤溶酶在甲醇酵母中的表达及产物分析

李亚东  
【摘要】:新型溶栓药的研制正成为人们研究的热点,作为新来源的第三代溶栓药蚯蚓纤溶酶也倍受关注。蚯蚓也称“地龙”,在中国传统中医中用来治疗高热神错、惊痫抽搐、关节痹痛、肢全麻木、半身不遂、肺热咳喘、尿少水肿及高血压等症。蚯蚓纤溶酶(Earthworm Fibrinolytic Enzyme,EFE)是近年来在蚯蚓体内发现的一类多蛋白质组分的丝氨酸蛋白酶。EFE既具有直接溶解纤维蛋白的纤溶酶活性,又具有类尿激酶的纤溶酶原激活活性(因此EFE又被称为Lumbrokinase),具有良好的开发前景。 本室经亲和层析自蚯蚓匀浆液一步提取蚯蚓纤溶酶,并通过DEAE纤维素离子交换层析和制备电泳,将EFE进一步分离纯化得到了12个单一组分,随后根据蚯蚓纤溶酶最佳组分7的N末端氨基酸序列设计简并引物,以蚯蚓cDNA为模板,获得该组分蛋白质的部分编码序列,将该序列分别插入热启动诱导的pBV221和融合型的pTBYT11质粒,转化大肠杆菌进行表达,产物均以包含体形式存在。与此同时将上述基因与甲醇酵母分泌型表达载体pPIC9K重组,利用电击转化法成功实现EFE基因在甲醇酵母中的转化和染色体整合。 本实验在已有工作基础上,通过对电击条件的优化,摸索出LN—101型国产电转仪电转化甲醇酵母的最佳条件(4500V/cm、10μF),可以得到大量转化子(5×10~3个/μgDNA)。在此基础上,利用原核表达产物通过微量免疫制备了大量特异性很高的抗体,建立了原位双膜法对转化子进行了大量筛选,得到了上百株重组子。通过western botting将本实验表达的EFE与天然EFE各组分进行分析,确定本实验所表达的蛋白为EFE的7组分。同时首次将EFE基因转入携带有外源蛋白HSA基因的重组子,筛选出EFE与HSA共表达的重组菌株。最后,通过正交实验对诱导表达条件做了初步研究。
【学位授予单位】:河北大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:Q814

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前8条
1 彭先凤,陶建宁,彭余田,鲍锦库;赤子爱胜蚓五种纤溶酶组分的分离纯化及对纤维蛋白原酶解的初步研究[J];华西药学杂志;1999年01期
2 刘俊峰,王新泉,徐磊,张季平,梁栋材,常文瑞;编码蚯蚓纤溶酶组分A基因的cDNA克隆及表达[J];科学通报;2002年22期
3 路英华 ,金汝成;蚯蚓纤溶酶的提取、性质鉴定和溶介血栓的研究[J];兰州大学学报;1986年01期
4 徐义辉,梁国栋,孙兆军,陈飞,付士红,柴玉波,侯云德;蚯蚓纤溶酶新基因PV_(242)的克隆与表达[J];生物化学与生物物理进展;2002年04期
5 赵锐,纪建国,童元鹏,陈倩,蒲海,茹炳根;赤子爱胜蚓(Eisenia foetida)中抗肿瘤与纤溶酶原激酶活性蛋白质的分离与鉴定[J];生物化学与生物物理学报;2002年05期
6 赵静,李东风;抗凝血蛋白质分子的研究现状[J];微生物学通报;2002年05期
7 陈飞,李莉,孟宪志,梁国栋,刘艳玲,吴红艳;蚯蚓溶栓酶基因的克隆及非融合性表达[J];中国药学杂志;2003年12期
8 杜平中;溶栓药物研究新进展[J];中国新药杂志;2001年08期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 解佰纯;李景鹏;;蚯蚓纤溶酶的研究进展[J];东北农业大学学报;2006年06期
2 李冬光;施晓丽;;蚯蚓抗菌肽对贵州黄鸡生产性能的影响研究[J];饲料工业;2011年12期
3 陈强,冯孝义;甘肃药用动物的研究现状及建议[J];甘肃科学学报;1994年03期
4 戴燕,黄胜起,静天玉;大平2号蚯蚓纤溶酶酶活的测定[J];河北大学学报(自然科学版);1993年02期
5 赵晓瑜;张冬;李亚东;;蚯蚓纤溶酶7~#组分基因在甲醇酵母中的克隆与表达[J];河北大学学报(自然科学版);2005年06期
6 秦奕辉;储炬;黄文华;庄英萍;张嗣良;;蚯蚓纤溶酶(EFE-3D)基因的合成及其在毕赤酵母中的表达[J];华东理工大学学报(自然科学版);2006年04期
7 徐凤彩,高向阳,王炜军,詹福建;蚯蚓体内营养和药物有效成分的研究进展[J];华南农业大学学报;2001年03期
8 贺石林,彭延古,李安国,唐荣德,易小兰,彭学著;地龙提取液的抗凝作用与毒性[J];湖南医科大学学报;1990年02期
9 余蓉,祁晖,张涛,吴梧桐;1株诱变的枯草杆菌溶栓酶体内外溶栓性质初探[J];四川大学学报(医学版);2005年01期
10 彭先凤,曾蓉,陈丽波,杨继虞,邵承斌,刘开熹;药用蚯蚓纤溶酶的制备及其性质的研究[J];华西药学杂志;1998年01期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 张玉;连桂芳;张治国;;蚯蚓抗肿瘤成分的分离与研究[A];2007年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2007年
2 薄其青;葛鑫;崔佳乐;姜雪;刘剑凯;洪敏;;动物抗肿瘤活性蛋白质或多肽提取物作用机制研究进展[A];创新驱动,加快战略性新兴产业发展——吉林省第七届科学技术学术年会论文集(下)[C];2012年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王少华;日本刺沙蚕蛋白酶的纯化、鉴定及日本刺沙蚕纤溶酶的部分药效学研究[D];吉林大学;2011年
2 吴秋玲;水蛭、斑蝥对肿瘤血管生成及VEGF、MMP表达的影响[D];湖北中医药大学;2011年
3 刘晓兰;根霉纤溶酶发酵、纯化和酶学性质研究[D];天津科技大学;2004年
4 刘东;根霉纤溶酶发酵过程优化及其溶栓作用的试验研究[D];天津科技大学;2005年
5 施海彬;重组葡激酶动脉内溶栓治疗急性脑栓塞的动物实验研究[D];南京医科大学;2005年
6 于永生;人尿激酶原突变体的构建与特性分析[D];西北农林科技大学;2005年
7 齐海萍;豆豉纤溶酶的制备、酶学特性及功能性质研究[D];江南大学;2004年
8 赵静;蚯蚓蛋白同功酶III-1、II结构与功能的研究[D];吉林大学;2003年
9 刘殿峰;蚓激酶基因在牛乳腺中的表达及其转基因兔的建立[D];吉林大学;2006年
10 王佃亮;一种新型海洋纤溶酶的研究[D];中国海洋大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 杜学敏;蚯蚓纤溶酶的分离纯化及部分组分的性质[D];河北大学;2007年
2 郑伟萍;PVDF/PAN/有机纳米粘土杂化中空纤维超滤膜的制备与表征[D];中国海洋大学;2010年
3 周海;蚓激酶的提取纯化、酶学性质及抗血栓效果研究[D];武汉工业学院;2010年
4 郭妍妍;纤溶酶基因在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达[D];河北农业大学;2011年
5 唐景财;可口革囊星虫纤溶酶的分离纯化及其性质的研究[D];广西医科大学;2011年
6 邓熙;通络法对急性脑梗塞患者Hs-CRP、DD及TM的影响[D];广州中医药大学;2011年
7 刘彩平;产纤溶酶菌DC-YJ11的筛选鉴定、混合发酵优化及纤溶酶的分离纯化[D];华南理工大学;2011年
8 田艳;纳豆菌液体发酵产生纤溶酶的研究[D];华南热带农业大学;2001年
9 璩竹玲;海洋假单胞菌碱性蛋白酶的抗栓作用研究[D];青岛大学;2002年
10 张勇;离子诱变选育纤溶酶(Plasmin)高产菌以及部分酶学性质研究[D];四川大学;2002年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张彦斌,徐长法;溶栓剂蛋白质工程的新进展[J];北京大学学报(自然科学版);2000年02期
2 马端;特异性溶栓剂:葡激酶[J];国外医学.心血管疾病分册;1998年04期
3 郑宏宇;葡激酶的实验与临床研究进展[J];国外医学.心血管疾病分册;1999年05期
4 彭先凤,曾蓉,陈丽波,杨继虞,邵承斌,刘开熹;药用蚯蚓纤溶酶的制备及其性质的研究[J];华西药学杂志;1998年01期
5 麦炜颐,曾群英,李玉杰,何清,杜志民,陈国伟;巴曲抗栓酶治疗不稳定型心绞痛的疗效及其对血小板聚集的影响[J];临床心血管病杂志;1999年01期
6 徐义辉,梁国栋,孙兆军,陈飞,付士红,柴玉波,侯云德;蚯蚓纤溶酶新基因PV_(242)的克隆与表达[J];生物化学与生物物理进展;2002年04期
7 徐小龙,刘清亮;尖吻蝮蛇毒内一种新抗凝血因子ACF II 的纯化及特性[J];生物化学与生物物理学报;2000年01期
8 路英华,金汝成,吴应文,孟雪琴;钜齿远蚓(Amynthas dancataa)纤溶酶的分离纯化及其若干性质[J];生物化学杂志;1988年02期
9 熊 ,杨四成,刘晓英,李令媛,茹炳根;蚯蚓纤溶酶的分离纯化及部分序列的测定[J];生物化学杂志;1997年03期
10 杨星勇,程惊秋,裴炎,阎光凡,张玉方;华广虻(Tabanusamaenus Walker)溶纤活性蛋白的纯化及生物活性分析[J];中国生物化学与分子生物学报;1999年04期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 胡燕,孟小林,徐进平,张俊杰,王健,鲁伟;蚯蚓纤溶酶基因的cDNA克隆及其序列分析[J];武汉大学学报(理学版);2004年02期
2 张伟,刘秀丽,赵晓瑜;蚯蚓纤溶酶的糖成分分析[J];生物技术;1997年04期
3 章骥,赵永芳;蚯蚓纤溶酶的纯化及稳定性研究[J];氨基酸和生物资源;1999年04期
4 杨志兴,杨学成,张云湖,马元生,李洪超,刘伟民,赵晓祥,姜凯波,张昕,赵克强,董桂华,张凤琴;赤爱胜蚯蚓(Eisenia Foetida Sarigny)纤溶酶的研究Ⅱ药理学作用[J];生物技术;1992年01期
5 刘俊峰,王新泉,徐磊,张季平,梁栋材,常文瑞;编码蚯蚓纤溶酶组分A基因的cDNA克隆及表达[J];科学通报;2002年22期
6 赵晓瑜,静天玉,王彦芳,王会文,李亚东;蚯蚓纤溶酶在大肠杆菌中的克隆与表达[J];河北大学学报(自然科学版);2002年04期
7 杨志兴,杨学成,张云湖,马元生,李洪超,刘伟民,赵晓祥,姜凯波,赵克强,董桂华;赤爱胜蚯蚓(Eisenib Foetide Sorigng)纤溶酶的研究 1.提取纯化和生物化学性质[J];生物技术;1991年05期
8 陈飞,孟宪志,李莉,单风平,吴红艳,桓明辉,陈杰;蚯蚓纤溶酶基因P_(239)的原核表达、纯化及活性测定[J];微生物学杂志;2004年01期
9 隋洪艳,李红,严宜明,杨立清,石男;一种新型蚯蚓纤溶酶的部分性质研究[J];微生物学免疫学进展;2005年02期
10 熊 ,杨四成,刘晓英,李令媛,茹炳根;蚯蚓纤溶酶的分离纯化及部分序列的测定[J];中国生物化学与分子生物学报;1997年03期
中国重要会议论文全文数据库 前8条
1 赵晓瑜;静天玉;姜晓燕;段明星;郑昌学;;蚯蚓纤溶酶抗原性的研究[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
2 刘俊峰;王新泉;徐磊;张季平;常文瑞;梁栋材;;编码蚯蚓纤溶酶组分A基因的cDNA克隆及表达[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年
3 王会文;赵晓瑜;静天玉;;蚯蚓纤溶酶基因在甲醇酵母中的克隆[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
4 王锋;望超;李梅;张季平;桂璐璐;梁栋材;常文瑞;;蚯蚓纤溶酶组分B和F的鉴定、结晶和初步晶体学研究[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年
5 汤涌;王锋;望超;江涛;张季平;梁栋材;常文瑞;;蚯蚓纤溶酶组分A(EFEa)的晶体结构研究[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年
6 武金霞;张贺迎;;抗胃蛋白酶水解的蚯蚓纤溶酶组分[A];2007年全国生化与生物技术药物学术年会论文集[C];2007年
7 崔大岺;赵晓瑜;候艳;高珊;刘彬彬;;蚯蚓纤溶酶F-I-0基因的电子克隆[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年
8 李莉;吴岑;赫荣乔;;蚯蚓纤溶同功酶EFEa溶解人类纤维蛋白的双重途径[A];第九次全国生物物理大会学术会议论文摘要集[C];2002年
中国硕士学位论文全文数据库 前9条
1 杜学敏;蚯蚓纤溶酶的分离纯化及部分组分的性质[D];河北大学;2007年
2 薛晓庆;基于蛋白质组学技术的蚯蚓纤溶酶分析方法研究[D];东北大学;2011年
3 米国桥;蚯蚓纤溶酶基因在番茄中的表达研究[D];河北大学;2009年
4 殷鹏;去糖基化对蚯蚓纤溶酶部分生物学性质的影响[D];河北大学;2009年
5 徐晟;蚯蚓纤溶酶的分离纯化及降脂效果的研究[D];湖南农业大学;2011年
6 季红;壳寡糖联合蚯蚓纤溶酶对体内外肝癌细胞生长的抑制作用及其机制探讨[D];南京中医药大学;2011年
7 崔大岺;蚯蚓纤溶酶F-I-0基因的电子克隆[D];河北大学;2006年
8 张冬;蚯蚓纤溶酶组分7~#基因的重组表达及包含体产物复性[D];河北大学;2006年
9 代萌;蚯蚓纤溶酶的分离纯化、乳膏的制备及其临床疗效观察[D];中国医科大学;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026