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《河北大学》 2009年
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共振光散射技术测定HRP及磁性纳米粒子的制备应用

王磊  
【摘要】:DNA杂交检测及免疫分析在生命科学研究中具有重要的意义,广泛应用于生物学研究、医学诊断等方面。随着生命科学的迅速发展,已有方法如放射性标记、酶标法等的局限性已日益显露出来,所以研究普遍适用性好、操作简便、灵敏度高的DNA杂交检测及免疫检测新方法显得越来越迫切。 本文第一部分是测定生化分析中常用的一种标记物-辣根过氧化物酶(HRP),原理是HRP催化H202氧化四甲基联苯胺(TMB)生成大分子聚合物并产生强烈的共振光散射,由此建立了操作简单快速、高灵敏度测定HRP的新方法。探讨了酸度、TMB浓度、H202浓度、温度等对散射信号的影响。在最佳实验条件下测定HRP的线性范围为1×10-7~1×10-6g/L,最低检出限为1.8×10-8g/L。 第二部分是以1,6-己二胺为氨基功能化试剂,利用水热-溶剂热的技术,一步合成了带有氨基功能团、在水溶液中分散较好、尺寸合适的Fe3O4纳米粒子。 第三部分是发现Fe3O4纳米粒子能够催化H2O2氧化四甲基联苯胺生成蓝色物质,当加入硫酸终止反应后颜色由蓝色变为黄色,最大吸收峰在450 nm处,且吸收峰强度与Fe3O4浓度成正比关系,应用这一现象我们设计利用固相杂交技术实现间接测定特定的DNA序列的含量。以标记特定序列寡聚核苷酸的磁性纳米粒子为探针,通过杂交反应生成三明治复合体,其中Fe3O4纳米粒子的量与待测靶序列的寡聚核苷酸浓度成正比。然后用紫外分光光度法测定复合体上纳米粒子的含量,以确定待测靶序列的含量。
【学位授予单位】:河北大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:TB383.1

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【参考文献】
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