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《河北工业大学》 2007年
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溶胶—凝胶法固定南极假丝酵母脂肪酶B的研究

檀文礼  
【摘要】: 本文对溶胶—凝胶法固定脂肪酶CALB(Candida antarctic lipase B,南极假丝酵母脂肪酶B)进行了较为系统的研究,并通过添加保护剂和保护膜的方法对CALB分子进行保护。 首先,在水解酶活检测方法上对传统的橄榄油水解法进行改进,脂肪酶通过催化油酸乙酯乳化液水解生成游离油酸的量定义酶活,使用固定pH滴定法测定油酸量,使检测结果更准确。 其次,研究了固定化过程中水含量、缓冲溶液pH值、交联剂、酶原溶液的量对固定化酶活的影响。在酶分子的保护处理中采用两种途径,一、筛选具有保护效果的糖分子作为保护添加剂融入酶原溶液中;二、引入脂质体膜,将酶原溶液在卵磷脂与胆固醇混合溶液中进行保护预处理。并对固定化条件利用正交实验进行了五因素四水平的优化,得出固定化酶制备的适宜条件为:1mg脂肪酶CALB溶于60μLH2O中,加入10mg木糖制备成酶原溶液,取80μL酶原溶液与500μL正癸烷溶液(溶有1.5%胆固醇,6%卵磷脂)混合,充分振荡分散后,倾入600μL固定化载体前驱体溶液(含有聚乙二醇PEG400)中,振荡,静置,老化48h制得约0.2g左右的固定化酶样品。 再次,对制备的CALB固定化酶进行了红外分析、差热分析、电镜扫描表征和粒度扫描表征,将固定化酶与N435(CALB吸附固定于大孔丙烯酸树脂上)在热稳定性、反复使用性方面进行比较,结果表明:用本方法制得的固定化酶优于商品酶N435。 最后,建立了固定化酶催化乳酸与乙醇酯化反应的数学模型,并进行了实验验证,结果表明二者吻合良好。
【学位授予单位】:河北工业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:TQ920

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【引证文献】
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【参考文献】
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【同被引文献】
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