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《河北联合大学》 2011年
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阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠NF-kB及GFAP表达的影响

王淑歌  
【摘要】:目的: 本实验旨在用豚鼠全脊髓匀浆(GPSCH)加完全福氏佐剂(CFA)作为抗原,诱导Wistar大鼠建立EAE模型,同时给予不同剂量阿托伐他汀干预治疗,并对EAE大鼠发病率、临床症状、组织病理变化和脊髓组织内核因子-kB(NF-kB)及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化进行观察分析,为临床应用提供理论基础。 方法: 1动物分组:Wistar大鼠,雌性,6-8周,体重160-180g,100只,随机抽取10只作为正常对照组,余大鼠经免疫诱导后随机分为EAE组、低剂量治疗组(2mg/kg)和高剂量治疗组(8mg/kg),每组30只。再分别将EAE组和低、高剂量治疗组随机分为14天、21天和28天三个亚组,每亚组10只大鼠。 2模型制备:用豚鼠全脊髓匀浆加上完全福氏佐剂(佐剂中含卡介苗4mg/ml)混合乳化后按0.4mL/只分别于大鼠(除正常对照组)四足垫内皮内注射。从抗原免疫后第1天开始,分别给予低、高剂量治疗组不同剂量的阿托伐他汀灌胃治疗,每天一次持续至大鼠处死时。 3神经功能评分:于免疫诱导后当日及以后每天对大鼠的体重、精神状态、活动情况进行观察2次,并对大鼠进行神经功能评分。根据Kono等的标准用双盲法进行临床症状评分:0分,无明显异常;1分,尾巴无力;2分,轻微后肢无力;3分,严重后肢麻痹;4分,四肢麻痹;5分,死亡。以大鼠大于或等于l分为临床EAE发病。 4组织病理学:麻醉大鼠,经主动脉快速灌注生理盐水约300-400mL,再灌注4%(质量浓度)多聚甲醛300mL,待四肢及尾部全部僵硬后,小心取出脊髓腰膨大,分组浸于4%多聚甲醛中,石蜡包埋,组织切片,HE染色,在光学显微镜下观察脊髓组织炎性细胞浸润情况。 5免疫组织化学染色:取大鼠脊髓腰膨大处组织,石蜡包埋,做4μm横断组织切片,高压抗原修复,滴加一抗:NF-kB或GFAP多克隆抗体,滴加PV-6001,DAB显色,脱水,透明,中性树胶封片,光学显微镜下观察NF-kB及GFAP的表达情况。 6各组数据以均数±标准差( X±S)表示,应用SPSS17.0统计分析软件作统计学处理,发病率和复发率的比较采用卡方检验,多组计量资料比较应用单因素完全随机方差分析,方差分析有差异时用LSD检验作两两比较,以P0.05为差异有统计学意义。 结果: 1发病率、复发率、潜伏期及最高神经功能评分EAE组、低剂量治疗组、高剂量治疗组的发病率分别为87%、80%、80%,各组间两两比较差异无显著性(P0.05)。EAE组、低剂量治疗组、高剂量治疗组28天亚组的复发率分别为60%、40%、30%,各组间两两比较差异无显著性(P0.05)。高剂量治疗组与EAE组比较,潜伏期延长,差异有显著性(P0.05)。低剂量治疗组较EAE组潜伏期稍延长,但差异无显著性(P0.05)。高剂量治疗组与EAE组比较,病情减轻,最高神经功能评分降低,差异有显著性(P0.05)。低剂量治疗组与EAE组比较,最高神经功能评分稍降低,差异无显著性(P0.05)。 2病理改变 EAE组大鼠脊髓组织主要病理改变为:HE染色可见小血管周围有大量炎性细胞浸润,形成“袖套样”改变。药物治疗组同EAE组比较有不同程度的减轻。EAE组、低剂量治疗组和高剂量治疗组21天亚组均较14天亚组血管袖套数减少,差异有显著性(P0.05)。EAE组、低剂量治疗组和高剂量治疗组28天亚组均较21天亚组血管袖套数增加,差异有显著性(P0.05)。高剂量治疗组均较同期EAE组血管袖套数减少,差异有显著性(P0.05)。低剂量治疗组较同期EAE组血管袖套数稍减少,差异无显著性(P0.05)。 3免疫组化法检测脊髓组织内NF-kB的表达 NF-kB免疫反应产物位于细胞浆及细胞核中,呈棕黄色者为阳性。正常对照组脊髓组织中仅有少量散在的NF-kB阳性细胞,其它组均比正常对照组多,差异有显著性(P0.05)。EAE组、低剂量治疗组和高剂量治疗组21天亚组均较14天亚组NF-kB阳性细胞数减少,差异有显著性(P0.05)。EAE组、低剂量治疗组和高剂量治疗组28天亚组均较21天亚组NF-kB阳性细胞数增加,差异有显著性(P0.05)。高剂量治疗组均较同期EAE组NF-kB阳性细胞数减少,差异有显著性(P0.05)。低剂量治疗组较同期EAE组NF-kB阳性细胞数稍减少,差异无显著性(P0.05)。 4免疫组化法检测脊髓组织内GFAP的表达 GFAP免疫反应产物位于星形胶质细胞胞浆中,呈棕黄色者为阳性。正常对照组脊髓组织内GFAP阳性细胞数较少,其它组均比正常对照组多,差异有显著性(P0.05)。EAE组、低剂量治疗组和高剂量治疗组21天亚组均较14天亚组GFAP阳性细胞数增多,差异有显著性(P0.05)。EAE组、低剂量治疗组和高剂量治疗组28天亚组均较21天亚组GFAP阳性细胞数减少,差异有显著性(P0.05)。高剂量治疗组均较同期EAE组GFAP阳性细胞数增加,差异有显著性(P0.05)。低剂量治疗组较同期EAE组GFAP阳性细胞数稍增加,差异无显著性(P0.05)。 结论: 1本研究成功建立大鼠急性及复发性EAE模型。 2阿托伐他汀可延长EAE大鼠潜伏期、改善临床症状、减轻EAE大鼠脊髓内炎症细胞浸润的程度,证实阿托伐他汀对EAE大鼠有保护作用。 3阿托伐他汀对EAE大鼠的保护作用可能与下调大鼠脊髓中NF-kB的表达有关。 4阿托伐他汀对EAE大鼠的保护作用可能与上调大鼠脊髓中GFAP的表达有关。 5阿托伐他汀对EAE大鼠的保护作用与剂量有关。
【学位授予单位】:河北联合大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R965

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