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《河北联合大学》 2014年
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二膦酸盐对糖尿病大鼠下颌骨骨折愈合影响的实验研究

石鹰  
【摘要】:目的本实验通过建立大鼠Ⅰ型糖尿病下颌骨骨折模型,观察阿仑膦酸钠与胰岛素联合应用于Ⅰ型糖尿病大鼠下颌骨骨折愈合的过程,探讨阿仑膦酸钠在糖尿病干扰下对大鼠下颌骨骨折愈合的影响,为糖尿病颌骨骨折筛选临床用药提供依据及动物实验数据。 方法选用6~8周龄,体重300±20gWistar大鼠96只,随机分为4组,空白对照组(A组),糖尿病骨折组(B组),糖尿病骨折+胰岛素组(C组),糖尿病骨折+胰岛素+阿仑膦酸钠组(D组),每组24只。适应性喂养两周后,应用链脲佐菌素(STZ)大剂量一次性腹腔注射,建立I型糖尿病动物模型。三天后,测定随机血糖浓度,根据相关文献,血糖浓度16.7mmol/L大鼠,视为造模成功。恢复饲养3d后,10%水合氯醛全身麻醉下行大鼠左侧下颌骨骨折模型造模术。术后,除空白对照组及糖尿病骨折组外,其余各组给予胰岛素控糖。术后1d起糖尿病骨折+胰岛素+阿仑膦酸钠组给予35mg/kg/w阿仑膦酸钠灌胃,其余各组给予等量的生理盐水灌胃。术后在2w,4w,6w,8w时每组各处死大鼠6只,取材,应用ELISA方法检测血清中OPG及TRACP-5b含量,取出下颌骨行骨密度检测和X线片检查后,放入4%多聚甲醛固定48h,再用10%乙二胺四乙酸(EDTA)将骨组织脱钙60d。脱钙完成后,组织块石蜡包埋行HE染色组织形态学观察,OPG免疫组织化学检测及TRACP-5b特异性染色。 结果1糖尿病造模成功后,大鼠出现典型的糖尿病“三多一少”症状;骨折模型建立后,伤口周围软组织红肿,无感染症状,实验过程中糖尿病大鼠的血糖水平较稳定,建立糖尿病大鼠骨折模型成功。2造模成功后,2w,4w,6w,8w各组间进行X线比较:2w时各组间X线片显示大鼠骨折线密度均较低;4w,6w,8w时空白对照组及糖尿病骨折+胰岛素+阿仑膦酸钠组骨折区域密度相对较高,骨折线模糊。骨密度比较:术后2w,4w,糖尿病骨折+胰岛素+阿仑膦酸钠组骨密度明显高于糖尿病骨折组及糖尿病骨折+胰岛素组,有统计学意义。组织形态学观察:糖尿病骨折+胰岛素+阿仑膦酸钠组在骨折2w,4w,6w时破骨细胞数目较少、骨小梁数量、骨小梁宽度、骨小梁长度等优于糖尿病骨折组。免疫组化检测:抗酒石酸酸性磷酸酶-5b在骨痂区2w,4w,6w时糖尿病骨折+胰岛素+阿仑膦酸钠组表达低于糖尿病骨折+胰岛素组及糖尿病骨折组有统计学意义(P0.05)。骨保护素:在骨痂区各组间均有表达,2w,4w,6w时糖尿病骨折+胰岛素+阿仑膦酸钠组表达均高于糖尿病骨折+胰岛素组及糖尿病骨折组,有统计学意义(P0.05),8w虽有表达,但其数值无统计学意义(P0.05)。 结论1一次性大剂量腹腔注射STZ以及外科手术方法的应用可成功建立大鼠I型糖尿病下颌骨骨折模型。2糖尿病大鼠骨折愈合质量差,比较容易出现愈合延迟甚至不愈合。3阿仑膦酸钠联合胰岛素在糖尿病大鼠下颌骨骨折模型中可起到促进骨折愈合的作用,其可能机制为阿仑膦酸钠促进OPG的表达及抑制TRACP-5b的释放,抑制破骨细胞在糖尿病骨折愈合区域的过度增殖从而促进骨愈合。
【学位授予单位】:河北联合大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:R782.4;R587.1

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