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《河北联合大学》 2014年
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Cs菌丝粉对大鼠脓毒性急性肾损伤中klotho蛋白表达的影响

卢海源  
【摘要】:目的通过检测脓毒血症急性肾损伤大鼠肾组织中klotho蛋白的表达情况,并应用Cs菌丝粉干预,来研究klotho蛋白在脓毒血症急性肾损伤发病机制中的作用。 方法选取健康雄性SD大鼠72只(等级:SPF),体重250g左右,4周龄,随机分为空白对照组(n=16)、CLP组(模型组)(n=28)、Cs菌丝粉干预组(n=28)。对照组普通进食水,开腹后找到盲肠只作轻轻挤压,不结扎穿刺,模型组普通进食水,行CLP术;干预组为Cs菌丝粉干预组,于术前1周开始冬虫夏草[Cs]组5g/(kg·d)灌胃,行CLP术。对照组术前15min、术后3h皮下注射生理盐水20mg/kg,后2组分别于术前15min、术后3h皮下注射盐酸左氧氟沙星20mg/kg,术后为补充手术过程中丢失体液量给以生理盐水5ml/kg皮下注射。每组分别于术后6h、12h、24h通过腹主动脉采血(对照组每组每个时间点2只,其余每组每个时间点6只),然后分离血清(用3000r/min离心机离心15min),检测血清肌酐及尿素氮,ELISA法测定肾组织匀浆中的klotho蛋白、MDA、CAT水平;取静脉血做细菌培养;取出肾脏,将右肾放入4%多聚甲醛中固定24至48小时,之后用石蜡包被,通过HE染色观察肾组织病理损伤,免疫组化法检测klotho蛋白表达及定位。每组于术后12小时分别随机取一只老鼠左肾上级约1cm3放入戊二醛中固定,用于电镜检测行电镜检测。每组余10只大鼠观察生物学行为变化及4天、7天存活率。 结果1模型组大鼠精神欠佳,运动迟缓;进食水较少;毛发散乱直立。剖腹可见腹水为淡血性,且量较多,明显恶臭味;肠管充血水肿,肠管组织粘连较重,部分盲肠末端发黑。对照组无上述变化。干预组大鼠术后一般状况介于A、模型组之间。2血肌酐:干预组各时间点血肌酐浓度显著低于模型组(P0.05),于12h后开始下降,24h接近对照组水平(P0.05),但仍稍高于对照组;与对照组比较,模型组血肌酐浓度则显著升高(P0.05)。3血尿素氮:与对照组比较,模型组各时间点尿素氮水平均显著升高(P0.05),干预组各时间点血尿素氮水平较模型组明显降低(P0.05),但6h时与对照组差异不大(P0.05),但仍明显高于对照组。4免疫组化肾组织klotho蛋白表达情况:与对照组、模型组相比,干预组肾组织klotho蛋白表达明显上升(P0.05)。5肾组织匀浆klotho蛋白水平:模型组血klotho蛋白水平明显低于对照组(P0.05),干预组则明显高于模型组(P0.05)。6肾组织匀浆MDA水平:模型组明显升高(P0.05),干预组较模型组明显下降(P0.05)。7肾组织匀浆CAT含量:干预组较模型组明显升高(P0.05),模型组较对照组明显下降(P0.05)。8血细菌培养,对照组无细菌生长,模型组、干预组均可见细菌生长,可检出大肠杆菌、变形杆菌、假单胞菌属和少量格兰阳性球菌。9对照组、模型组、干预组4天存活率分别为100%、30%、40%;干预组与模型组比较差异虽无统计学意义,但干预组死亡大鼠的存活时间可延长24h左右。对照组、模型组、干预组7天存活率分别为100%、20%、30%,模型组、干预组比较差异无统计学意义(P0.05)。 结论1Cs菌丝粉能增强脓毒性急性肾损伤大鼠koltho蛋白的表达,对肾脏具有一定的保护作用。2氧化应激损伤参与了脓毒性急性肾损伤的发病过程。3Cs菌丝粉能改变脓毒性急性肾损伤大鼠的预后。
【学位授予单位】:河北联合大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:R459.7

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