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《华北理工大学》 2017年
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新型亲水富集材料的制备及正常人尿液糖基化蛋白的富集鉴定

黄俊杰  
【摘要】:目的1蛋白质的N-糖基化修饰参与了许多重要的生物过程,是多种重大疾病诊断标志物研究的热点。与其他体液活检样本相比,尿液可以无创,大量获取,并且不受稳态调节的影响,可以在一定程度上反映整个机体的生理和病理状态。因此对人尿液蛋白质N-糖基化的规模化研究对疾病标记物的筛选和治疗靶点的发现均具有重大意义;2由于人尿液中的N-糖蛋白含量有限,修饰比例较低,在质谱分析时N-糖肽易被高丰度的非糖肽所掩盖,难于鉴定。因此,发展高效、高选择性的富集材料是实现尿蛋白N-糖基化深度覆盖的必要条件。方法1使用亲水填料富集30例健康人尿液中的蛋白酶解后的肽段,并将富集到的肽段进行液质联用质谱鉴定,把得到的质谱数据导入分析软件,获得糖肽及糖基化位点信息;2先在硅球表面接上巯基,然后利用巯基-烯点击化学方法,将带有烯基的两性离子亲水单体键合到硅球表面。结果1男女分别鉴定到946和880个糖蛋白,利用生物信息学软件GO进行分析得到男女尿蛋白信息;2使用[3-(甲基丙烯酰氨基)丙基]二甲基(3-硫代丙基)氢氧化铵内盐(SPP)制备了两性离子修饰亲水硅胶材料(SPP-Si O2),将材料应用于标准糖蛋白和健康人尿蛋白N-糖肽的富集和质谱检测,从Ig G中鉴定到36条肽段,三个批次不同的SPP-Si O2材料分别富集并质谱鉴定959个,837个和877个N-糖基化位点,选择性均超过70%,从人尿液中一共鉴定到包含1065个位点的633个尿液糖蛋白,比文献报道的要多12.2%。其中81.2%的蛋白和73.9%的位点在至少两次富集中得到鉴定。结论1成功建立了稳定、高效的人尿液糖型及糖基化蛋白质规模化定量分析策略,并初步获得大规模的健康人尿液蛋白质糖基化修饰数据集,为实现筛选潜在生物标记物打下基础;2成功合成新型两性离子亲水富集材料,并成功应用于复杂样本,明显的提高了对肽段的富集效率。
【学位授予单位】:华北理工大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:O652.6;R446.12

【参考文献】
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