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《华北理工大学》 2018年
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BMSCs-CM介导内质网应激对肺泡巨噬细胞自噬的调控

于雷  
【摘要】:目的1建立矽肺大鼠模型及体外染尘细胞模型,证实二氧化硅(SiO2)粉尘可以诱导内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)的激活。2探讨能否通过抑制SiO2诱导的内质网应激降低矽肺发生发展过程中的自噬水平。3探讨骨髓间充干细胞条件培养基(Bone Marrow Stem Cell Conditioning Medium,BMSCs-CM)是否能够通过调控内质网应激来抑制自噬的发生,延缓矽肺进程。方法:本研究将分为体内、外实验两个部分开展,分别从动物以及细胞领域进行探讨研究。1体内实验动物分组及模型制备:45只成年雄性SD大鼠,随机分成3组:对照组,模型组,IRE1抑制剂组,每组15只。模型组、IRE1抑制剂组采用非暴露式气管插管一次性灌注SiO2粉尘混悬液(50g/L)建立矽肺大鼠模型,对照组注入等量灭菌NaCl。IRE1抑制剂组大鼠通过腹腔注射方式给予STF083010(1.0mg/kg),每3天注射一次,余两组等量灭菌NaCl处理。各组于造模3、7、14天分批处死5只大鼠。检测方法:肺组织苏木素—伊红(HE)染色验证造模是否成功。肺泡巨噬细胞(Alveolar macrophage,AM)HE染色观察其形态学改变;免疫印迹法检测IRE1、LC-3、Beclin-1蛋白的表达情况;免疫荧光法检测IRE1、LC-3蛋白在AM中定位。2体外实验动物分组及模型制备:选取约4周龄、质量约110g的SPF级雄性SD大鼠作为提取BMSCs的动物供体。另取50只SPF级健康成年雄性SD大鼠获取AM,将AM分为4组:对照组仅加入无血清培养液,处理组加入SiO2粉尘悬液(50μg/ml)建立体外矽肺模型。IRE1抑制剂组加入40μmol/L的STF-083010试剂,BMSCs-CM组加入等体积已制备好的条件培养液。各实验组完成相应的实验处理后分为6h、12h、18h、24h、36h。免疫印迹法检测GRP78、IRE1、LC-3、Beclin-1表达量。计算结果差异有统计学意义用P0.05表示。结果:1形态学观察贴壁后原代BMSCs细胞体积小,呈圆形或扁圆形,平形状或漩涡状排列生长,第三代BMSCs形态更趋于均一,镜下观察如成纤维细胞样,核清晰,胞浆丰富。2肺组织形态学结果:对照组大鼠肺泡壁薄,组织结构清晰,间质均匀透亮。模型组大鼠3d时可见浸润的炎性细胞,肺泡腔少有浆液性渗出,肺泡间隔增厚,水肿不明显。7d时肺泡间隔明显增宽变厚,肺间质内出现以肺泡巨噬细胞为主的炎性浸润。14d时肺泡间隔增厚明显,肺组织结构不清,出现大量纤维组织增生,有矽结节形成。3 AM的形态学观察结果:对照组贴壁后的AM细胞呈扁圆形或球形,核质结构清晰。与对照组相比,矽肺模型组AM体积增大,分布生长不均一,部分细胞核表现为单侧分布,胞质疏松,胞内可见点样硅尘晶体。BMSCs-CM组AM生长优于矽肺模型组,多数细胞的形态规则,核质结构清晰。4Western blot检测结果:体内实验结果显示对照组IRE1、LC-3、Beclin-1蛋白呈基础表达,各时间点表达无明显变化;矽肺模型组比较对照组各蛋白表达量在7d、14d明显高于同期对照组(P0.05),随时间成增量表达。体外实验结果显示IRE1、GRP78、LC-3、Beclin-1蛋白在对照组中仅有基础表达,各时间点无明显变化,矽肺模型组各蛋白表达量在6h后随时间延长逐渐增高,直至18h达高峰,高于同期对照组基础表达(P0.05)。相比矽肺模型组,IRE1抑制剂组、BMSCsCM组的各蛋白在各时间表达显著下降(P0.05),BMSCs-CM组与IRE1抑制剂组相比各蛋白表达差异不大,总体趋势相似。免疫荧光结果显示在体内实验中IRE1、LC-3呈胞浆表达,3d、7d、14d不同时间点的对照组仅有基础表达,相比同期,模型组IRE1、LC-3荧光明显增强,抑制剂组比模型组IRE1、LC-3荧光表达减弱,随时间呈动态变化。结论1硅尘颗粒可诱导大鼠肺泡巨噬细胞发生内质网应激。2 IRE1抑制剂STF083010能够抑制矽肺大鼠肺泡巨噬细胞内质网应激反应,延缓其自噬过度激活效应;3 BMSCs-CM可阻断大鼠肺泡巨噬细胞部分因内质网应激效应发生的自噬激活,对矽肺大鼠肺泡巨噬细胞产生一定保护作用。
【学位授予单位】:华北理工大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R135.2

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 高俊玲;朱会兴;赵曼;李冉;江小华;田艳霞;崔建忠;;BMSCs移植对矽肺大鼠肺泡巨噬细胞自噬活化的影响[J];中国民康医学;2015年14期
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1 林海英;;矽肺并发肺结核临床分析[J];中国水电医学;2010年04期
2 王焕;陈刚;孙志谦;唐亚丽;韩科;张政;沈福海;;中国煤矿工人北戴河疗养院入院治疗的165例矽肺患者矽肺进展危险因素分析[J];职业与健康;2018年03期
3 王焱;宁琼;于永红;谷晓新;;矽肺患者对呼吸操的认知及锻炼现状调查[J];中国城乡企业卫生;2018年03期
4 赵星海;;124例矽肺合并肺结核患者诊治的临床分析[J];现代诊断与治疗;2018年09期
5 李聪;吴奇峰;李伟锋;赵娜;邓小峰;梁伟辉;谭剑明;王海兰;;矽肺患者自身免疫指标检测意义的研究[J];工业卫生与职业病;2017年02期
6 马春梅;;全胸腔高频脉冲排痰系统对矽肺患者的作用[J];当代临床医刊;2017年03期
7 唐友勇;王正艳;杨中卫;李威;石明;邝军;;支气管肺泡灌洗联合无创正压通气对矽肺患者肺功能的影响[J];内科急危重症杂志;2016年03期
8 陈璇;;矽肺患者实施综合护理干预的可行性研究[J];现代诊断与治疗;2016年18期
9 袁淑青;;呼吸操干预措施对矽肺患者呼吸功能康复的影响[J];中国疗养医学;2015年02期
10 陈佳;;初诊矽肺患者心理分析及健康教育方法[J];海峡预防医学杂志;2015年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 吕国才;;血清氧化功能检测在矽肺患者中的意义[A];2009年浙江省检验医学学术年会论文汇编[C];2009年
2 张素华;张兆志;;148例矽肺患者肺叶灌洗回收液检验结果分析[A];淄博市第十一届自然科学优秀学术成果论文集[C];2008年
3 孙凤龙;周志道;王长军;唐子华;;关于矽肺患者股骨粗隆间的骨折的治疗[A];第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛论文汇编[C];2009年
4 李廷;李庆;李立威;;煤矽肺患者氧化与抗氧化功能的研究[A];全面建设小康社会:中国科技工作者的历史责任——中国科协2003年学术年会论文集(下)[C];2003年
5 王瑞;范昭宾;高衍新;王坤;万恩广;孔令敏;;矽肺患者诱导痰中白细胞介素-6、白细胞介素-16含量测定及其意义[A];2008年全国职业性呼吸系统疾病学术研讨会论文集[C];2008年
6 黄娜;袁腾;陈刚;朱丽;白玉萍;金玉兰;陈志远;张林;徐应军;袁扬;姚三巧;;矽肺患者肺泡巨噬细胞表面A类清道夫受体表达及其对细胞凋亡的调控作用[A];中国职业安全健康协会2013年学术年会论文集[C];2013年
7 袁腾;黄娜;陈刚;朱丽;白玉萍;金玉兰;陈志远;张林;徐应军;袁扬;姚三巧;;矽肺患者肺泡巨噬细胞线粒体凋亡有关蛋白的表达及其意义[A];中国职业安全健康协会2013年学术年会论文集[C];2013年
8 王洁;杨文兰;;脉冲振荡技术评价矽肺患者肺功能的应用价值研究[A];第十三次全国劳动卫生与职业病学术会议论文汇编[C];2014年
9 金香玉;;在矽肺患者中开展健康教育的体会[A];新世纪预防医学面临的挑战——中华预防医学会首届学术年会论文摘要集[C];2002年
10 李小萍;葛宪民;秦少珍;麦志丹;王力珩;覃雪;;矽肺及矽肺结核患者T淋巴细胞与免疫球蛋白水平及相关性研究[A];2008年全国职业性呼吸系统疾病学术研讨会论文集[C];2008年
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1 小楚 王莉 辽宁中医药大学第一附属医院 徐士雅 武汉市职业病防治院副主任医师 江碧云 福州市疾病预防控制中心 张碧珍 厦门中山医院副主任医师;矽肺非怪病 中医有作为[N];中国中医药报;2009年
2 洪本荣;省城专家上门治疗矽肺患者[N];健康报;2006年
3 杨菊凤;钼矿开采繁荣 矽肺患者成群[N];中国矿业报;2004年
4 蒲昭和;矽肺患者保健食疗方[N];上海中医药报;2008年
5 首都医科大学附属北京朝阳医院职业病与中毒医学科主任医师 郝凤桐;矽肺病可以预防[N];健康报;2009年
6 昭和;以食养肺[N];医药经济报;2005年
7 张会杰;民工维权遭遇遁迹矿主[N];中国矿业报;2006年
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1 姚武;尘肺病相关基因筛选研究[D];四川大学;2005年
2 张海英;应答蛋白基因多态性对矽肺发生的修饰作用[D];复旦大学;2007年
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1 于雷;BMSCs-CM介导内质网应激对肺泡巨噬细胞自噬的调控[D];华北理工大学;2018年
2 王焕;不同期别矽肺病人肺泡巨噬细胞差异蛋白质研究[D];华北理工大学;2018年
3 陈紫莺;肺内淋巴转运在矽肺发病过程中的作用研究[D];华北理工大学;2018年
4 李聪;矽肺患者自身免疫相关指标水平及与临床病情关系的研究[D];广东药科大学;2017年
5 闵春燕;矽肺患者下呼吸道感染的病原菌谱及其耐药性的初步研究[D];苏州大学;2017年
6 刘荣荣;二氧化硅的能谱CT实验研究及在矽肺诊断中的初步应用[D];苏州大学;2017年
7 王黎楠;老年矽肺患者生命质量现状及干预研究[D];山西医科大学;2013年
8 林丽;矽肺患者生存质量调查及其影响因素分析[D];安徽医科大学;2007年
9 金露;检测驱虫斑鸠菊注射液导致矽肺患者血清蛋白的差异[D];新疆医科大学;2017年
10 杨阳;矽肺患者细胞免疫水平及肺功能的相关性研究[D];中国医科大学;2007年
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相关机构
>南方医科大学
>复旦大学
相关作者
>张海英 >赵娜
>吴芬
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