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《华北理工大学》 2019年
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环状RNA hsa_circ_0011940在抗结核药物性肝损伤患者外周血中的表达及功能研究

杜莹  
【摘要】:目的 筛选并验证抗结核药物性肝损伤(anti-tuberculosis drug-induced liver injury,ADLI)患者血浆中差异表达的环状RNA(circular RNA,circRNA),并从细胞学实验中进一步探讨circRNA作为微小RNA(micro RNA,miRNA)海绵在ADLI中的作用机制。方法 从人群和细胞两方面进行研究。1人群研究:收集唐山市第四医院诊断为肺结核的住院病人的血标本和临床资料,根据严格的纳入排除标准选择肝损伤组与非肝损伤组患者各16例,采用芯片技术筛选出两组中差异表达circRNA并预测circRNA的靶miRNA;再选择肝损伤组与非肝损伤组患者各150例,采用qRT-PCR法验证circRNA、miRNA的差异表达,ELISA法检测两组炎症因子(NF-κB、TNF-α、IL-6)的表达水平;t检验或χ2检验分析患者基本资料、has_circ__0011940及miR-21表达量、ALT、AST、NF-κB、TNF-α和IL-6蛋白水平变化是否有统计学意义;Pearson相关分析判断has__circ__0011940与肝功指标(ALT、AST)、miR-21、炎症因子(NF-κB、TNF-α、IL-6)的相关性。2细胞学实验:以最佳三药联合浓度构建肝损伤细胞模型,通过全基因合成法构建重组过表达质粒,将细胞分为六组:空白组、药物组、circRNA过表达组、过表达对照组、circRNA敲减组、敲减对照组,HE染色观察各组细胞形态学变化;赖氏法检测各组ALT、AST含量变化;qRT-PCR法检测has_circ_0011940及F-1κB、TNF-α、IL-6基因的mRNA表达变化;Western Blot法检测各组NF-κB蛋白表达水平;ELISA法检测各组炎症因子TNF-α、IL-6表达水平。为了反向验证circRNA是否作为miRNA海绵来调控ADLI中的炎症反应,进一步将细胞分为空白组、药物组、miR-21过表达组、过表达对照组、miR-21敲减组、敲减对照组六组,检测各组细胞各项指标的变化。结果 1人群研究:在ADLI患者外周血利用circRNA芯片共筛选出6661个差异表达的circRNA,其中表达下调的有6389个,表达上调的有272个;所选目标环状has_circ-_0011940在ADLI患者血浆中表达下调(P0.05),其作为RNA海绵结合miR-21的能力减弱致使ADLI患者外周血中miR-21表达水平升高,与预测结果一致;并且ADLI患者外周血中炎症调节因子NF-κB及炎症因子TNF-α、IL-6表达水平也升高(均P0.05);has-_circ-_0011940与肝功指标(ALT、AST)、miR-21、炎症因子(NF-κB、IL-6、TNF-α)呈负相关(r 分别为-0.674、-0.545、-0.309、-0.779、-0.684、-0.492,均P0.05)。2细胞研究:与空白对照组比,药物组细胞形态改变,数量减少,ALT、AST含量增加,has_circ_0011940表达降低,炎症因子NF-κB、TNF-α、IL-6的mRNA及蛋白水平均升高(均P0.05);过表达has_circ_0011940可降低炎症因子NF-κB、TNF-α、IL-6的mRNA及蛋白水平(均P0.05);而敲减has_circ_0011940则加重抗结核药物致肝细胞损伤进程中的炎症反应(P0.05)。反向验证实验各组中,药物组细胞miR-21表达高于空白组;敲减miR-21可减轻抗结核药物致肝细胞损伤进程中的炎症反应;而过表达miR-21则加重抗结核药物致肝细胞损伤进程中的炎症反应(均P0.05)。结论 1抗结核药物性肝损伤进程中has_circ_0011940表达水平降低,并与肝功指标(ALT、AST)、miR-21、炎症因子(NF-κB、IL-6、TNF-α)呈负相关。2 Has_circ_0011940作为miR-21海绵来抑制NF-κB炎症信号通路从而降低抗结核药物性肝损伤进程中的炎症反应。图15幅;表15个;参161篇。
【学位授予单位】:华北理工大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2019
【分类号】:R575;R52

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