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《河北农业大学》 2018年
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禽流感(H9亚型)灭活疫苗的研制

王子昌  
【摘要】:H9亚型禽流感为低致病性禽流感,其感染禽类会引起呼吸困难、采食下降,就、产蛋率下降等临床症状。且易继发其他疾病,危害极大。H9亚型禽流感因其病原的特性,在新的宿主环境和免疫压力下已发生突变,这使得其难得到有效的防控。而且,H9亚型禽流感病毒其基因可以作为多种高致病型流感基因的基因载体,通过基因重组后能够产生对人有致病作用的新型病毒,威胁公共卫生安全。对H9亚型AIV的流行病学调查和对其致病性进化的掌握,可有助于我们更好的预防和控制H9亚型低致病性禽流感。本研究通过对河北地区禽流感病毒进行流行病学调查,了解H9亚型在河北地区的流行现状,并对H9亚型禽流感病毒进行分离,研究其遗传进化和致病性,为该病的防控提供理论依据和技术支持。2017年~2018年收集河北地区各地方疑似H9亚型禽流感共计139份,通过检测,139份病料中有84份为禽流感,约占总病料的64.43%,通过血凝抑制试验进行分型,H9亚型65份,约占77.38%。H9亚型AIV发病季节主要在1、2、3、4和12月,发病日龄分布较广,蛋鸡集中在1月龄,肉鸡集中在3周龄。选取SPF鸡胚分离病毒,传至5代,分离得到两株禽流感病毒,命名为ZD5和SD。测定血凝价ZD5为9log2,SD为8log2,EID_(50)为10~(-8.75)和10~(-7.25),通过HA基因设计引物,目的片段为550bp,与27株河北省参考株进行比对,两株分离株之间同源性为95.8%,ZD5与A-chicken-hebei-0822-2007、A-chicken-hebei-C6-2007同源性最高,为967%;SD与A-chicken-hebei-C6-2007、A-chicken-hebei-0822-2007同源性最高,为90.1%。两株分离株都与2007年参考株亲缘关系较近。通过人工感染试验,将ZD5肌注21日龄SPF鸡,使其发病。临床症状为流鼻涕,打喷嚏,张口呼吸。剖检可见气管有粘液,肺部病变,腺胃乳头肿大出血,盲肠扁桃体出血。组织学观察可见气管黏膜脱落,部分管腔有浆液性渗出物及炎性细胞;肺部血管有炎性渗出物,肺泡内充斥红细胞,肺泡轮廓不完整。分离株ZD5的潜伏期大约为3天。攻毒后第5天采集棉拭子通过SPF鸡胚分离,其分离率达到90%,尿囊液可凝集1%鸡红细胞。将ZD5作为制备疫苗的毒株,将其灭活配制水相,再与油相按油水比为3:1的比例混匀乳化,制备成油乳剂灭活苗。根据兽医药典规程检测疫苗的剂型、稳定性、粘度、无菌、安全性和效力,检测结果表明:制备的灭活苗其剂型为油包水型,稳定性良好,粘度符合标准,无菌,注射动物体内无不良反应,免疫SPF鸡后,鸡的HI抗体水平显著提升,免疫21 d后攻毒,其保护率为100%。
【学位授予单位】:河北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S852.4

【参考文献】
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