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《河北农业大学》 2018年
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重组鸡白介素-7对鸡传染性法氏囊病毒灭活疫苗的免疫增强作用

崔丹  
【摘要】:传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBD Virus,IBDV)引起的以免疫抑制为特征的一种急性接触性传染病,目前该病尚未得到有效控制,给养鸡业带来巨大的经济损失。目前主要通过接种疫苗预防此病的发生,主要疫苗有弱毒苗和灭活苗,弱毒苗免疫效果较好,但存在毒力返强和亚临床症状出现的危险;灭活苗毒副作用较小,但免疫原性较低。所以研究和开发增强IBDV灭活苗的佐剂对有效防治IBDV的发生具有重要意义。近些年细胞因子类生物佐剂受到人们的广泛关注,因为该类佐剂不仅具有天然细胞因子的免疫调节功能,同时具有毒副作用小、生物安全性高等特点,可明显增强多种疫苗的免疫效果。白介素-7是动物体一种重要的多功能细胞因子,它不仅具有促进B细胞、T细胞形成和发育的作用,同时还具有协调其他细胞因子提高机体免疫力的作用。过去我们研究证实,白介素-7(IL-7)可明显提高犬细小病毒DNA疫苗的免疫原性,同时还发现重组鸡IL-7(chIL-7)具有刺激机体提高抗IBDV和提高IBDV VP2 DNA疫苗免疫原性的活性。然而重组chIL-7是否具有增强IBDV灭活苗的免疫原性尚不清楚。为此,本论文通过制备重组chIL-7,分析了chIL-7对IBDV灭活苗的免疫增强作用。首先通过PCR从含有chIL-7 cDNA基因的质粒中扩增chIL-7基因,并将其插入到原核表达载体pET-20b(+)中,构建成与His标签融合的chIL-7原核分泌性表达载体pET20b-chIL-7/H。将表达载体转化E.coli BL21制备出工程菌,通过IPTG诱导使其表达。用Ni-NTA琼脂糖胶粒纯化chIL-7,用Wsetern-blot检测chIL-7蛋白,用2E8细胞增殖试验检测chIL-7的生物活性。然后用IBDV灭活苗和不同剂量的chIL-7重组蛋白共同免疫鸡,隔1周加强免疫1次。在免疫前和首免疫后不同时间采血并分离血清。通过ELISA检测抗体滴度和中和抗体效价,用MTT法检测免疫30 d后鸡脾脏淋巴细胞的刺激指数,用ELISA检测培养基γ-干扰素、IL-4的含量。然后用IBDV强毒对免疫鸡进行攻毒,攻毒后8 d统计免疫鸡的死亡率及疫苗的保护率,综合评价chIL-7对IBDV灭活苗免疫原性的增强作用。结果表明,构建的表达载体能够介导chIL-7基因在大肠杆菌BL21中进行分泌性表达,制备的重组chIL-7具有生物活性。鸡免疫结果显示,chIL-7与IBDV灭活苗的共免疫组其血清的抗体滴度和中和抗体效价均显著高于单独免疫组;共免疫组鸡淋巴细胞刺激指数和γ-干扰素表达水平也显著高于单独免疫组。动物攻毒试验结果显示,共免疫组鸡的存活率(91%-97%)明显高于单独免疫组(78%),另外共免疫组的法氏囊指数、组织病变程度及感染组织的病毒滴度均低于单独免疫组。由此可见,重组chIL-7可明显增强IBDV灭活苗的免疫原性,提高灭活苗对免疫鸡的保护率。这项研究为重组ch IL-7作为生物佐剂,在未来IBD病预防中的应用奠定了基础。
【学位授予单位】:河北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S852.4

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