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《河北农业大学》 2018年
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子宫内气泡诱导小鼠胚胎早期死亡机理

刘若男  
【摘要】:胚胎移植技术(Embryo transfer,ET)是胚胎工程的最后一个步骤,对胚胎的妊娠率起着关键性的作用。在小鼠、牛羊以及人类的胚胎移植过程中,常常会有一定量的空气伴随胚胎被移植进入子宫。这些气泡是否影响胚胎移植的结果,至今没有定论。研究表明在豚鼠、大鼠、仓鼠等啮齿类动物中,体内雌、孕激素水平在一定条件下,宫腔内空气能诱导子宫内膜发生蜕膜化反应。同时小鼠胚胎移植结果显示,子宫内气泡能够导致早期胚胎死亡。蜕膜化能否正常进行是胚胎着床发育的关键因素。因此为了探究子宫内气泡对胚胎发育的影响,我们向假孕3.5d、正常妊娠3.5d小鼠子宫角内移植微量空气,收集7.5d蜕膜组织,通过形态观察、子宫内膜通透性检验、组织切片、蛋白质双向电泳、转录组测序及RT-PCR验证的实验方法对其机理进行研究。结果显示子宫内气泡能够诱导小鼠子宫角发生明显的增粗、增重、体积增大,且发生明显的血管重塑,双核细胞大量出现,各类细胞不规则分布,不能够区分主、次蜕膜区,子宫内胚胎大量死亡。蛋白质双向电泳结果显示在被检测范围内,子宫内气泡诱导蜕膜与正常蜕膜无蛋白差异点。而转录组测序结果显示,两组之间有64个差异表达基因,其中有59个差异表达基因在正常蜕膜中高表达。差异表达基因中表达量最高的前10位基因依次H19,Prl7a1,Prl3d1,Prl4d1,Prl2c3,Krt8,Mmp9,Prl2c2,Plet1,Cts7。对差异表达基因进行GO分析,这些差异基因主要富集在胎盘发育、滋养层巨细胞分化、细胞对白细胞介素因子1的反应、细胞对肿瘤坏死因子的反应、生长激素活性调节、细胞蛋白分解过程中蛋白质水解等生物过程,富集基因都为正常蜕膜高表达基因。使用RT-PCR对转录组测序结果进行验证,结果显示被验证的8个基因的表达趋势与转录组测序结果一致。结果表明移植进入子宫内的气泡导致子宫内膜多个位点发生异常蜕膜化反应,基因表达模式发生变化,影响胚胎正常发育,最终导致胚胎死亡。这些研究结果不仅有利于提高小鼠胚胎移植成功率,更为重要的是,它为人类以及其他动物胚胎移植研究提供了新思路。
【学位授予单位】:河北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S814.8

【参考文献】
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